發(fā)布時間：2018-02-21 06:40

  本文關鍵詞： 家蠶 Hippo通路 BmYki 表達 功能　出處：《西南大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：Hippo通路是近年發(fā)現(xiàn)的一條通過調控細胞生長、增殖及凋亡等過程從而控制器官大小的重要信號轉導通路,該通路在果蠅及哺乳動物中非常保守。轉錄共激活因子Yorkie(Yki)是Hippo通路下游的核心成員,Hippo通路主要經由Yki調控下游靶基因進并實現(xiàn)控制器官大小的功能。家蠶是著名的經濟昆蟲和鱗翅目模式昆蟲。研究家蠶器官大小調控相關信號通路及其關鍵基因,對于揭示鱗翅目昆蟲的共有生物性狀以及利用基因靶標改造家蠶的生產性能,具有重要理論價值和現(xiàn)實意義。本研究以家蠶Hippo通路下游的轉錄共激活因子BmYki為靶標,對其進行克隆以及基因結構、亞細胞定位、時空表達特征等分析,并重點在細胞水平上探究其生物學功能。取得的主要結果如下:1、BmYki基因的克隆及序列特征分析自家蠶中鑒定并克隆了BmYki基因的CDS序列,其中從二化性大造品系中克隆了3種剪接形式BmYki-S1、BmYki-S2和Bm Yki-S3,從多化性黃血品系中克隆了4種剪接形式BmYki-S1、BmYki-S2、BmYki-S3和BmYki-S4。這是迄今為止首次發(fā)現(xiàn)轉錄共激活因子Yki存在多種選擇性剪接形式。2、BmYki基因的亞細胞定位分析選取BmYki-S1和BmYki-S2兩種剪接形式,構建了BmYki-S1和BmYki-S2分別與EGFP融合的亞細胞定位表達載體,轉染家蠶卵巢細胞株BmNs并進行DAPI染色和熒光觀察,結果表明BmYki-S1和BmYki-S2均定位在BmNs的細胞質中,這與果蠅及哺乳動物Yki基因的定位結果類似。3、BmYki基因的組織和發(fā)育時期轉錄表達分析利用熒光定量PCR技術,對BmYki基因在五齡第3天家蠶各主要組織以及一齡1天至化蛾1天等發(fā)育時期的表達特征進行了分析。結果表明,Bm Yki基因在檢測的各組織和發(fā)育時期的表達水平較低,其中在后部絲腺和中部絲腺的表達水平相對最高,在精巢、卵巢、氣管、頭部的表達水平相對較高,在脂肪體、血液、馬氏管、前部絲腺中的表達水平相對最低。BmYki基因在五齡3天和化蛾1天各有一個表達峰值,其中五齡3天的峰值最高,其他各發(fā)育時期的表達水平較低。BmYki基因在絲腺以及絲蛋白開始大量合成的五齡第3天表達最為活躍,暗示其可能參與了絲腺或絲蛋白合成調控。4、BmYki基因的細胞超表達分析利用GAL4/UAS雙元表達系統(tǒng),在家蠶胚胎細胞株BmE中過表達BmYki基因,然后對11個已知的Hippo通路下游靶基因以及11個絲蛋白合成相關基因的表達情況進行熒光定量PCR檢測,結果顯示:下游靶基因Myc、Ras、E2F1、Diap1、Caspase1、Kibra和Ex均有顯著上調表達;Diap2、Caspase9略有上調表達;Wg略有下調表達;CycE和基因無明顯變化;絲蛋白合成相關基因FibH、P25、Seri1、Seri2、Seri3、SGF1、SGF2和SGF3出現(xiàn)明顯下調表達;FibL、Sage和Dimm無明顯變化。上述結果表明,家蠶BmYki(Hippo通路)具有調控細胞增殖及凋亡等生物學過程的功能,并參與了絲蛋白合成相關基因的表達調控。5、BmYki基因的細胞敲除分析利用CRISPR/Cas9系統(tǒng),在家蠶胚胎細胞株BmE中進行了BmYki基因敲除,然后對11個已知的Hippo通路下游靶基因以及11個絲蛋白合成相關基因的表達情況進行熒光定量PCR檢測,結果顯示:敲除BmYki基因后,下游靶基因Myc、Ras、Diap1、Caspase9、Caspase1、Kibra和Wg均出現(xiàn)下調表達,這一變化趨勢與超表達BmYki相反;而絲蛋白合成相關基因的變化趨勢與超表達BmYki基本一致,其中FibH、P25、Ser1、Ser2、Ser3、SGF1、SGF2和SGF3出現(xiàn)下調表達。
[Abstract]:In this paper , we have studied the gene structure , the gene structure , the gene structure , the subcell localization , the space - time expression characteristic of the gene target gene . The results show that the expression level of the Bm Yki gene is lower than that of the Yki gene . The results showed that the downstream target gene Myc , Ras , Diap1 , Caspase9 , Caspase1 , Kibra and SGF3 were downregulated . The results showed that the change trend of the downstream target gene Myc , Ras , Diap1 , Caspase9 , Caspase1 , SGF2 and SGF3 was downregulated .

【學位授予單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：Q78

【相似文獻】

相關期刊論文 前8條

1 史夢婕;邵松軍;李潔媚;周艷芳;黃培春;;Hippo通路與腫瘤相關性研究進展[J];中國細胞生物學學報;2014年03期

2 鮑乾坤;何金龍;朱毅;;Hippo-YAP通路在心血管系統(tǒng)中的作用[J];生理科學進展;2014年03期

3 Xudong Huang;Lai Shi;Jun Cao;Fangfei He;Renling Li;Yan Zhang;Shuang Miao;Longjin Jin;Jia Qu;Zhouhua Li;Xinhua Lin;;The Sterile 20-Like Kinase Tao Controls Tissue Homeostasis by Regulating the Hippo Pathway in Drosophila Adult Midgut[J];Journal of Genetics and Genomics;2014年08期

4 丁鑫;孟剛;童曉玲;代方銀;魯成;;WW結構域與Hippo信號通路[J];蠶業(yè)科學;2013年06期

5 許飛;張進;馬端;;Hippo/YAP和Wnt/β-catenin通路的對話[J];遺傳;2014年02期

6 盧洪飛;萬福生;;Hippo-YAP信號通路在結直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用[J];生命的化學;2014年04期

7 門通;樸善花;滕春波;;Hippo信號通路轉錄效應因子TAZ/YAP對間充質干細胞分化的調控[J];遺傳;2013年11期

8 ;[J];;年期

相關會議論文 前3條

1 Zhan Yang;;MicroRNA-155 and Hippo/STK3 Form a Feedback Loop to Participate in Vascular Smooth Muscle Cell Proliferation[A];中國生物化學與分子生物學會第十一次會員代表大會暨2014年全國學術會議論文集——專題報告五[C];2014年

2 Hongtan Wu;Luyao Wei;Suyuan Ji;Fuqin Fan;Funiu Qin;Lanfen Chen;Dawang Zhou;;MST1/2-Yap signaling pathway in organ size control and cancer development[A];生命的分子機器及其調控網絡——2012年全國生物化學與分子生物學學術大會摘要集[C];2012年

3 Zhan Yang;Bin Zheng;Yu Zhang;Xin-hua Zhang;Ming He;Dong Ma;Jin-kun Wen;;MicroRNA-155 and Hippo/STK3 Form a Feedback Loop to Participate in Vascular Smooth Muscle Cell Proliferation[A];第十二屆全國脂質與脂蛋白學術會議論文匯編[C];2014年

相關重要報紙文章 前2條

1 記者 胡德榮;我學者發(fā)現(xiàn)原癌蛋白質YAP抑制劑[N];健康報;2014年

2 記者 徐瑞哲;人造“克星”抑制胃癌[N];解放日報;2014年

相關博士學位論文 前10條

1 安健;Nedd4-like E3泛素連接酶調控Angiomotin/p130蛋白穩(wěn)定性的分子機制研究[D];復旦大學;2011年

2 劉歡;Hippo通路效應蛋白YAP調控基因轉錄的機制與功能研究[D];浙江大學;2015年

3 劉鵬;HBV preS2 通過miR-338-3p 調控Hippo通路效應分子TAZ促進肝細胞肝癌作用研究[D];山東大學;2015年

4 朱國華;上調miR-130b通過滅活Hippo信號通路來增強膠質瘤干細胞的表型[D];新疆醫(yī)科大學;2015年

5 韓笑;Hippo信號通路中TEAD蛋白質的結構與功能研究[D];吉林大學;2016年

6 郭鵬達;RARγ的缺失通過調控Hippo-Yap信號通路促進結直腸癌的發(fā)生和轉移[D];蘇州大學;2016年

7 周菁;YAP在哮喘發(fā)生過程中的表達情況及其功能探討[D];南昌大學;2016年

8 鄧軍;CUL4A通過調控Hippo通路促胃癌細胞增殖和侵襲的分子機制[D];南昌大學;2016年

9 李佳;Hippo信號通路在調節(jié)卵巢生殖干細胞功能和延緩卵巢衰老中的作用[D];南昌大學;2016年

10 劉乃華;磷酸二酯酶5/PKG通過Hippo/TAZ信號調控前列腺癌腫瘤干細胞干性及其分子機制研究[D];浙江大學;2016年

相關碩士學位論文 前10條

1 陸亞紅;家蠶BmYki不同剪接體的功能研究[D];蘇州大學;2016年

2 宋春暖;家蠶Hippo通路成員的全基因組鑒定與分析[D];西南大學;2016年

3 王日遠;家蠶Hippo通路主基因BmYki的克隆、表達及功能初探[D];西南大學;2016年

4 王曉霞;E-cadherin介導的麥冬皂苷B調控非小細胞肺癌Hippo通路的機制研究[D];南京中醫(yī)藥大學;2016年

5 梁坤;Hippo信號通路在結直腸癌中的表達及臨床意義[D];青島大學;2014年

6 魏文超;Hippo信號通路在胃粘膜癌變過程中的作用[D];青島大學;2013年

7 向晟;Hippo通路主要組分與小鼠原始卵泡池大小的時序相關性研究[D];南昌大學;2014年

8 錢瑩;家蠶Hippo信號通路主要基因的研究[D];蘇州大學;2014年

9 沈龍霞;HCMV經Hippo-YAP信號通路對絨毛外細胞滋養(yǎng)細胞功能影響的體外研究[D];泰山醫(yī)學院;2014年

10 陳柯宏;LATS1基因去甲基化對人腎癌細胞生物學功能及其Hippo-YAP信號通路的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2014年

，

本文編號：1521282