本文關(guān)鍵詞： 斑節(jié)對蝦 Toll受體蛋白 細(xì)胞免疫模型 TLR信號通路 微生物刺激 先天性免疫　出處：《南方水產(chǎn)科學(xué)》2017年05期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：Toll受體蛋白(Toll receptors)是一類重要的模式識別受體,在無脊椎動物先天性免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。文章對斑節(jié)對蝦(Penaeus monodon)新型Toll9受體基因(Pm Toll9)進(jìn)行了研究:以人源胚胎腎細(xì)胞(HEK293T)成功構(gòu)建體外細(xì)胞免疫模型,通過免疫印跡方法證實(shí)Pm Toll9重組真核蛋白可在HEK293T中成功表達(dá)。雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測發(fā)現(xiàn)在200 ng轉(zhuǎn)染濃度處Pm Toll9對NF-κB報告基因的激活效果顯著。q RT-PCR數(shù)據(jù)證明PmToll9成功激活HEK293T細(xì)胞Toll-like receptor(TLR)信號通路,促進(jìn)通路下游髓樣分化因子(My D88)、腫瘤壞死因子(TNF-α)和白介素(IL-10)的上調(diào)表達(dá),同時酶聯(lián)免疫吸附測定結(jié)果證明Pm Toll9可促進(jìn)TNF-α蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)。斑節(jié)對蝦體內(nèi)細(xì)菌刺激實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)可激活Pm Toll9在肝胰腺、腸、淋巴和鰓中的表達(dá),哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)可顯著抑制Pm Toll9在肝胰腺中的表達(dá)。提示無乳鏈球菌可通過Pm Toll9激活Toll信號通路,引起機(jī)體免疫防御反應(yīng),而哈維氏弧菌對此過程具有一定的抑制作用。
[Abstract]:Toll receptor protein Toll receptor is an important type of pattern recognition receptor. In this paper, the novel Toll9 receptor gene Pm Toll9 of Penaeus Monodon (Penaeus Monodon) was studied. Human embryonic kidney cells (HEK293T) were used to successfully construct a cell immune model in vitro. The recombinant eukaryotic protein of PmToll9 was successfully expressed in HEK293T by Western blot. The results of double luciferase report system showed that the activation effect of PmToll9 on NF- 魏 B reporter gene was significant at 200ng transfection concentration. Q RT-PCR data proved PmToll9. Toll-like receptor TLR signaling pathway was successfully activated in HEK293T cells. To promote the up-regulation of the expression of myeloid differentiation factor (my D88A), tumor necrosis factor (TNF- 偽) and interleukin-10 (IL-10) downstream of the pathway. The results of enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa) showed that pm Toll9 could significantly up-regulate the expression of TNF- 偽 protein, and Streptococcus agalactiae could activate the expression of pm Toll9 in hepatopancreas, intestine, lymph nodes and gills. Vibrio harveyi) could significantly inhibit the expression of pm Toll9 in hepatopancreas, suggesting that Streptococcus actinomycetes can activate Toll signaling pathway through pm Toll9 and induce immune defense response, but Vibrio harveyi can inhibit this process to some extent.
【作者單位】： 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所農(nóng)業(yè)部南海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31202019) 廣州市珠江科技新星專項(xiàng)(201506010054) 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)(蝦)產(chǎn)業(yè)體系建設(shè)專項(xiàng)資金(CARS-47) 廣東省科技創(chuàng)新青年拔尖人才項(xiàng)目(2015TQ01N583)
【分類號】：S945.47

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本文編號：1496244