本文關(guān)鍵詞： 褐飛虱 井岡霉素 蛋白質(zhì)組學分析 脂肪酸合酶 RNA干擾　出處：《揚州大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：褐飛虱(同翅目、飛虱科)是典型的農(nóng)藥誘導再猖獗型水稻害蟲。井岡霉素是防治水稻紋枯病的抗生素類殺菌劑,由于毒性低,殘留低,成本低等特點,很容易被濫用。目前已發(fā)現(xiàn)井岡霉素噴霧處理和點滴處理均能刺激褐飛虱生殖,且噴霧處理的刺激作用大于點滴處理,但其刺激褐飛虱生殖的分子機制仍不清楚。本試驗通過井岡霉素不同處理間褐飛虱卵巢的蛋白質(zhì)組學分析,篩選出井岡霉素刺激褐飛虱生殖的關(guān)鍵蛋白,以闡明井岡霉素刺激褐飛虱生殖的分子機制,同時揭示噴霧處理刺激作用大于點滴處理的原因。1、井岡霉素不同處理間褐飛虱卵巢的蛋白質(zhì)組學分析利用同重同位素相對與絕對定量技術(shù),對井岡霉素各處理間褐飛虱卵巢進行蛋白質(zhì)組學分析。噴霧井岡霉素(JGM-S) vs噴霧對照(S-control)處理組共鑒定出284個差異蛋白(142個上調(diào),142個下調(diào)),點滴井岡霉素(JGM-T) vs點滴對照(T-control)處理組共鑒定出267個差異蛋白(130個上調(diào),137個下調(diào)),噴霧井岡霉素(JGM-S) vs點滴井岡霉素(JGM-T)處理組共鑒定出114個差異蛋白(62個上調(diào),52個下調(diào))。通過pathway注釋與富集分析,篩選出噴霧井岡霉素(JGM-S) vs噴霧對照(S-control)處理組與噴霧井岡霉素(JGM-S) vs點滴井岡霉素(JGM-T)處理組中都顯著上調(diào)的脂肪酸合酶進一步研究。2、干擾脂肪酸合酶基因?qū)诛w虱生殖的影響利用飼喂法對井岡霉素噴霧處理(JGM-S)的褐飛虱進行RNA干擾,形成干擾處理JGM-S+dsFAS(脂肪酸合酶基因表達量下降了58%)。產(chǎn)卵結(jié)果表明,干擾脂肪酸合酶基因后,褐飛虱產(chǎn)卵量下降46%,產(chǎn)卵歷期下降33%,雌蟲壽命下降24%。生理生化測定結(jié)果表明,dsFAS處理顯著降低了褐飛虱雌蟲體重和卵巢中粗脂肪含量。JGM-S+dsFAS處理組褐飛虱雌蟲卵巢中油酸、棕櫚酸、亞油酸、硬脂酸、肉豆蔻酸,脂肪體中油酸、棕櫚酸、肉豆蔻酸含量與對照(JGM-S)相比均顯著下降。3、褐飛虱吸食井岡霉素后生理生化變化取食100ppm和20ppm的井岡霉素使褐飛虱脂肪酸合酶基因表達量分別提高了54%和56%,卵黃原蛋白基因表達量分別提高了133%和94%。選取20ppm井岡霉素進一步飼喂研究發(fā)現(xiàn),褐飛虱雌蟲可溶性糖含量提高了46%、胰島素含量提高了17%、體重提高了10%,共生菌含量提高了38%。干擾脂肪酸合酶基因使褐飛虱雌蟲體重顯著下降,但對共生菌含量沒有顯著影響。
[Abstract]:Brown planthopper (Homoptera, planthopper) is a typical insecticide-induced re-rampant rice pest. Jinggangmycin is an antibiotic fungicide to control rice sheath blight, because of its low toxicity, low residue and low cost. It has been found that both spray treatment and drip treatment can stimulate the reproduction of brown planthopper, and the stimulative effect of spray treatment is greater than that of drip treatment. However, the molecular mechanism of the stimulation of brown planthopper reproduction is still unclear. Through proteomic analysis of the ovaries of brown planthopper in different treatments of Jinggangmycin, the key proteins of Jinggangmycin to stimulate the reproduction of brown planthopper were screened out. In order to elucidate the molecular mechanism of Jinggangmycin to stimulate the reproduction of brown planthopper, and to reveal the reason that spray treatment has more stimulative effect than that of drip treatment. Proteomics analysis of the ovaries of brown planthopper with different treatments of Jinggangmycin using the technique of iso-isotopic and absolute quantification. Proteomic analysis of the ovaries of brown planthopper treated with Jinggangmycin. JGM-S vs S-control). 284 differentially expressed proteins (142 up-regulated) were identified in the treatment group. A total of 267 differentially expressed proteins (130 up-regulated and 137 down-regulated) were identified in 142 down-regulated and infused Jinggangmycin (JGM-T) vs control (T-control) groups. A total of 114 differentially expressed proteins (62 up-regulated) were identified in the spray Jinggangmycin (JGM-S) vs drip Jinggangmycin (JGM-T) treatment group. 52 of them were down-regulated by pathway annotation and enrichment analysis. The jingangmycin (JGM-S) vs the spray control (S-control) treatment group and the spray Jinggangmycin (JGM-S) vs droplet Jinggangmycin (JGM-T) treatment group were screened out. Fatty acid synthase, which was significantly up-regulated in treatment group, was further studied. Effect of interfering Fatty Acid Synthase Gene on the Reproduction of Brown planthopper the RNA interference was carried out on the brown planthopper treated with jinggangmycin spray. The expression of fatty acid synthase gene in JGM-S dsFASs decreased by 58%. The results showed that the egg production of BPH decreased by 46% after interfering with the fatty acid synthase gene. The egg laying period decreased 33%, the female longevity decreased 24%. The physiological and biochemical results showed that. DsFAS treatment significantly decreased the body weight of female brown planthopper and the content of crude fat in ovary. JGM-S dsFAS treatment group showed oleic acid, palmitic acid, linoleic acid and stearic acid in ovary of female brown planthopper. The contents of myristic acid, oleic acid, palmitic acid and myristic acid in fat body were significantly lower than those in control group (JGM-S). Physiological and biochemical changes of Brown planthopper after ingesting Jinggangmycin 100 ppm and 20 ppm Jinggangmycin increased the expression of fatty acid synthase gene of brown planthopper by 54% and 56% respectively. The expression of vitellogenin gene was increased by 133% and 94ppm respectively. The results showed that the soluble sugar content of female brown planthopper increased by 46% by 20 ppm Jinggangmycin. Insulin content increased 17%, body weight increased 10%, symbiotic bacteria content increased 38%. Interference with fatty acid synthase gene significantly decreased body weight of female brown planthopper, but had no significant effect on symbiotic bacteria content.
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S435.112.3

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