本文關鍵詞： 黃瓜 Cd CsNAC 基因克隆 表達分析　出處：《中國農業(yè)科學》2017年10期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：【目的】研究黃瓜耐鎘(Cd)分子機制,結合生物信息學分析獲得一個NAC轉錄因子家族基因CsNAC019,對其進行克隆和表達分析,為進一步將該基因用于黃瓜耐Cd品種的改良與選育提供試驗基礎�！痉椒ā客ㄟ^PCR技術擴增CsNAC019全長;利用NCBI和DNAMAN進行序列比對和保守結構域分析;利用Expasy、TMHMM等在線軟件進行氨基酸組成、穩(wěn)定系數、親水系數分析;通過Plant CARE在線工具進行啟動子序列分析;采用MEGA 6.0軟件根據NJ方法,構建系統(tǒng)進化樹;采用q RT-PCR技術檢測Cd脅迫后黃瓜CsNAC019在葉中的表達情況,并用DPS 7.05數據處理系統(tǒng)軟件進行方差及顯著性分析�！窘Y果】CsNAC019含有典型的NAC保守結構域。通過BLAST分析比對,該基因在氨基酸序列上與擬南芥NAC019存在60%的同源性,兩者在從N端到C端有A、B、C、D、E 5個氨基酸相對保守區(qū)的序列高度一致。該基因CDS序列全長為960 bp,編碼319個氨基酸,編碼蛋白質分子量為35.66 k D,理論等電點為8.72,不穩(wěn)定系數為68.18,平均親水系數為-0.483。啟動子分析表明,除含有真核生物啟動子固有的TATA和CAAT元件外,CsNAC019的啟動子序列還存在G-box、ABRE、W-box、P-box、TCA-element、TC-richrepeats、HSE等多種響應逆境脅迫的順式元件。系統(tǒng)進化分析表明,CsNAC019與甜瓜、桃、蘋果、柑桔、葡萄、大豆等15種植物NAC轉錄因子有64%—96%的同源性,其中與甜瓜的NAC蛋白同源性最高,為96%。通過q RT-PCR分析發(fā)現,與對照相比,CsNAC019在Cd脅迫條件下表達量明顯上調(8.2倍)�！窘Y論】CsNAC019為黃瓜Cd脅迫誘導表達基因,推測其可能通過調節(jié)下游基因的表達調控黃瓜對Cd脅迫的應答。
[Abstract]:[objective] to study the molecular mechanism of cadmium tolerance in cucumber and obtain a NAC transcription factor gene CsNAC019 by bioinformatics analysis. In order to provide the experimental basis for further application of this gene to the improvement and breeding of Cd-tolerant cucumber varieties. [methods] the full-length CsNAC019 was amplified by PCR. Sequence alignment and conserved domain analysis were carried out by NCBI and DNAMAN. The amino acid composition, stability coefficient and hydrophilic coefficient were analyzed by using the on-line software Expasyy TMHMM. The promoter sequence was analyzed by Plant CARE online tool. The phylogenetic tree was constructed by using MEGA 6.0 software according to NJ method. Q RT-PCR technique was used to detect the expression of CsNAC019 in cucumber leaves under CD stress. The variance and significance were analyzed with DPS 7.05 data processing system software. [results] CsNAC019 contained typical conserved NAC domain. The results were compared by BLAST analysis. The amino acid sequence of this gene is 60% homology with Arabidopsis NAC019. The sequence of E 5 amino acids was highly consistent with that of conserved region. The CDS sequence of the gene was 960 BP, encoding 319 amino acids and encoding a molecular weight of 35.66 KD. The theoretical isoelectric point is 8.72, the instability coefficient is 68.18, and the average hydrophilic coefficient is -0.483.Promoter analysis shows that. In addition to the TATA and CAAT elements inherent in eukaryote promoters, the promoter sequence of CsNAC019 also contains G-boxbox ABRERE-W-box P-box. TCA-element-TC-rich repeat HSE and other cis-elements in response to stress stress. Phylogenetic analysis showed that CsNAC019 and muskmelon, peach. There was 64-96% homology of NAC transcription factors in 15 plants, such as apple, citrus, grape and soybean, and the highest homology was found with NAC protein in muskmelon. It was found by Q RT-PCR analysis that compared with the control. The expression of CsNAC019 was significantly up-regulated under CD stress. [conclusion] CsNAC019 is the gene that induces the expression of Cucumber under CD stress. It is speculated that it may regulate the response of cucumber to CD stress by regulating the expression of downstream genes.
【作者單位】： 東北農業(yè)大學園藝園林學院/農業(yè)部東北地區(qū)園藝作物生物學與種質創(chuàng)制重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金青年基金(31101545) 黑龍江省普通本科高等學校青年創(chuàng)新人才培養(yǎng)計劃(UNPYSCT-201500) 東北農業(yè)大學“青年才俊”項目(14QC07);東北農業(yè)大學“學術骨干”項目(16XG05)
【分類號】：Q943.2;S642.2
【正文快照】： 【研究意義】黃瓜(Cucumis sativus L.)是中國設施蔬菜生產中的主要栽培作物之一,由于溫室大棚內化肥、農藥等的連年使用,黃瓜易受到重金屬的毒害,其中,鎘(Cd)污染較為嚴重。近些年,Cd污染事件頻發(fā),例如,2009年8月在湖南瀏陽以及2012年1月在廣西龍源出現的Cd污染事件等。Cd是

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本文編號：1483830