本文關(guān)鍵詞： 反芻獸月形單胞菌 β-木糖苷酶 畢赤酵母 異源表達(dá) 酶學(xué)性質(zhì)　出處：《生物工程學(xué)報(bào)》2017年05期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：β-木糖苷酶(β-xylosidase,酶編號(hào)EC 3.2.1.37)是木聚糖降解酶系中的重要組成部分。本研究以畢赤酵母Pichia pastoris GS115為宿主菌嘗試表達(dá)反芻獸月形單胞菌Selenomonas ruminantium中的β-木糖苷酶基因Sxa。根據(jù)畢赤酵母對(duì)密碼子的偏愛性、mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)、GC含量和稀有密碼子,對(duì)Sxa基因進(jìn)行優(yōu)化;通過基因合成技術(shù)獲得了全長基因mSxa并構(gòu)建重組酵母表達(dá)載體pPIC9K-mSxa;以BglⅡ酶切重組載體pPIC9K-mSxa,電擊轉(zhuǎn)化將m Sxa基因?qū)氘叧嘟湍窯S115中,獲得的轉(zhuǎn)化子經(jīng)過表型和遺傳霉素G418抗性篩選、PCR鑒定,得到表達(dá)β-木糖苷酶基因的工程菌GS115-pPIC9K-mSxa;通過活性測定獲得高效表達(dá)β-木糖苷酶的重組酵母,并對(duì)重組β-木糖苷酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明,重組β-木糖苷酶的分子量約為66 kDa。在發(fā)酵罐水平表達(dá)的酶活性達(dá)到了287.61 IU/mL。對(duì)酶學(xué)性質(zhì)研究顯示,該酶在溫度為40-60℃,pH為5.0-7.0時(shí)較穩(wěn)定,其最適反應(yīng)溫度和pH分別為55℃和6.0,專一性地作用于β-木糖苷鍵。Mn~(2+)和Ca~(2+)對(duì)該酶具有激活作用,而Fe~(3+)、Cu~(2+)、Co~(2+)、Mg~(2+)、EDTA及SDS抑制其酶活性。本研究首次將反芻獸月形單胞菌的β-木糖苷酶基因轉(zhuǎn)化到畢赤酵母中獲得表達(dá),并具有較高活性,為進(jìn)一步工業(yè)化應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:尾 -xylosidase. Enzyme No. EC 3.2.1.37). It is an important component of xylan degrading enzyme system. In this study, Pichia pastoris was used in Pichia pastoris. Expression of Selenomonas by GS115 as host strain. The 尾 -xylosidase gene Sxa. in ruminantium is based on the preference of Pichia pastoris for codon. MRNA secondary structure GC content and rare codon were optimized for Sxa gene. The full-length gene mSxa was obtained by gene synthesis and the recombinant yeast expression vector pPIC9K-mSxa was constructed. The recombinant vector pPIC9K-mSxa was digested with Bgl 鈪，

本文編號(hào)：1480458