發(fā)布時(shí)間：2018-01-24 21:01

  本文關(guān)鍵詞： 顯齒蛇葡萄 實(shí)時(shí)定量PCR 內(nèi)參基因 看家基因 肌動(dòng)蛋白基因 -磷酸甘油醛脫氫酶基因 S核糖體rRNA基因 α-微管蛋白基因 β-微管蛋白基因 多聚泛素酶基因　出處：《中草藥》2017年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的篩選適用于顯齒蛇葡萄Ampelopsis grossedentata實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)的內(nèi)參基因。方法設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物,采用RT-PCR從顯齒蛇葡萄中克隆6個(gè)候選內(nèi)參基因片段,包括肌動(dòng)蛋白基因(Actin)、3-磷酸甘油醛脫氫酶基因(GAPDH)、18 S核糖體rRNA基因(18 S-rRNA)、α-微管蛋白基因(α-Tubulin)、β-微管蛋白基因(β-Tubulin)和多聚泛素酶基因(UBQ)。應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)這6個(gè)候選內(nèi)參基因在顯齒蛇葡萄不同組織器官中(莖尖、嫩葉、成熟葉、老葉、莖和根)的表達(dá)情況。借助Ge Norm、Norm Finder和Best Keeper 3種統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件綜合評(píng)價(jià)6個(gè)內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性。通過(guò)苯丙氨酸解氨酶基因(Ag PAL)的表達(dá)分析對(duì)篩選出的內(nèi)參基因進(jìn)行穩(wěn)定性驗(yàn)證。結(jié)果 18 S-rRNA、GAPDH和Actin的表達(dá)穩(wěn)定性較好,適合作為顯齒蛇葡萄不同組織基因表達(dá)研究的內(nèi)參基因,以這3個(gè)基因?yàn)閮?nèi)參基因分析Ag PAL基因的相對(duì)表達(dá)量,結(jié)果發(fā)現(xiàn)它們?cè)诟鹘M織器官中的表達(dá)變化趨勢(shì)基本一致。結(jié)論確定顯齒蛇葡萄qRT-PCR分析的合適內(nèi)參基因,為后續(xù)相關(guān)基因表達(dá)研究奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to screen Ampelopsis grossedentata real-time quantitative PCRs (. Real-time fluorescence quantitative PCR. Methods A degenerate primer was designed and six candidate internal reference gene fragments, including actin gene (actin), were cloned from grape by RT-PCR. The gene of glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) and ribosomal rRNA gene (18 S-rRNAs), 偽 -tubulin gene (偽 -Tubulin). 尾 -tubulin gene (尾 -Tubulin) and polyubiquianase gene (UBQN) were used to detect the six candidate internal reference genes in different tissues and organs of Vitis davidii by qRT-PCR. Stem tip. Expression of young leaves, mature leaves, old leaves, stems and roots, with the help of GE Norm. The expression stability of six internal reference genes was evaluated by Norm Finder and Best Keeper software. The expression of phenylalanine ammonia-lyase gene (Ag-PAL) was evaluated by using phenylalanine ammonia-lyase gene (Ag-PAL). Results 18 S-rRNA was used to verify the stability of the selected internal reference gene. The expression of GAPDH and Actin was stable and suitable for the study of gene expression in different tissues of Vitis davidii. These three bases were used to analyze the relative expression of Ag PAL gene. The results showed that the change trend of their expression in different tissues and organs was basically the same. Conclusion the suitable internal reference gene for qRT-PCR analysis of Vitis davidifolia can be used to lay a foundation for the further study of related gene expression.
【作者單位】： 福建農(nóng)林大學(xué)作物遺傳育種與綜合利用省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;福建農(nóng)林大學(xué)農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)研究所;福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家科技支撐計(jì)劃(2013BAD01B05)
【分類號(hào)】：R284
【正文快照】： 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time fluorescencequantitative PCR,q RT-PCR)是一種在傳統(tǒng)PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的新型核酸定量技術(shù),具有定量準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好和高通量等優(yōu)點(diǎn),已被廣泛應(yīng)用于基因的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄組分析等研究中[1-4]。在利用q RT-PCR技術(shù)進(jìn)行相對(duì)定量表達(dá)分析時(shí)

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本文編號(hào)：1461007