本文關(guān)鍵詞： 慢病毒載體 h CD/h CCR 質(zhì)粒 基因表達　出處：《華夏醫(yī)學》2016年05期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:構(gòu)建一種高效轉(zhuǎn)染h CD4和h CCR5基因的慢病毒載體。方法:應用Gateway技術(shù)構(gòu)建可表達h CD4和h CCR5的質(zhì)粒載體PLA.Ex Bi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR5,并進行酶切和測序鑒定,進行慢病毒包裝,用q RT-PCR方法檢測293T細胞中h CD4/CCR5的m RNA表達。將本慢病毒載體轉(zhuǎn)染于小鼠白血病細胞L615,應用q RT-PCR檢測細胞內(nèi)h CD4/CCR5 m RNA的表達及對HIV-1的易感性。結(jié)果:成功構(gòu)建PLA.Ex Bi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR5質(zhì)粒表達載體,包裝成的慢病毒載體在293T細胞中具有h CD4/CCR5 m RNA水平的高表達(P0.05);轉(zhuǎn)染于L615細胞亦表現(xiàn)出h CD4/CCR5 m RNA水平的高表達(P0.05),并具備了HIV-1入胞感染的特點。結(jié)論:成功建立h CD4和h CCR5基因雙啟動的慢病毒載體,可使目的細胞高效表達h CD4及h CCR5分子,對HIV-1宿主細胞的制備、HIV/AIDS的發(fā)病機制和抗病毒研究具有積極的意義。
[Abstract]:Objective: to construct a lentivirus vector with highly efficient transfection of h CD4 and h CCR5 genes. Methods: the expression of h CD4 and h CD4 was constructed by using Gateway technique. Plasmid vector PLA.Ex Bi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR5 of CCR5. The lentivirus was packaged by enzyme digestion and sequencing. The expression of h CD4/CCR5 m RNA in 293T cells was detected by Q RT-PCR method. The lentivirus vector was transfected into murine leukemia cell line L615. Q RT-PCR was used to detect the expression of h CD4/CCR5 m RNA and its susceptibility to HIV-1. Results: PLA.Ex was successfully constructed. Bi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR5 plasmid expression vector. The lentivirus vector was highly expressed in 293T cells at the level of h CD4/CCR5 m RNA. The overexpression of h CD4/CCR5 m RNA was also observed in L615 cells. Conclusion: the lentivirus vector of h CD4 and h CCR5 gene was successfully established. It can effectively express h CD4 and h CCR5 molecules in target cells, which has positive significance for the preparation of HIV-1 host cells and the study on the pathogenesis and antiviral effect of HIV / AIDS.
【作者單位】： 桂林醫(yī)學院生物技術(shù)學院;中山大學生命科學院;廣州中醫(yī)藥大學熱帶醫(yī)學研究所;桂林醫(yī)學院廣西肝臟損傷與修復分子醫(yī)學重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81660755;81573861)
【分類號】：Q78
【正文快照】： 2作者簡介:李雅婧(1993-),女,山西臨汾人,桂林醫(yī)學院2014級病理學與病理生理學專業(yè)碩士研究生,主要從事病原生物學研究。慢病毒是一類逆轉(zhuǎn)錄病毒,包括人免疫缺陷病毒(HIV)、猿免疫缺陷病毒(simian immunodeficiencyvirus,SIV)和貓免疫缺陷病毒(feline immunode ficiencyvirus,

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本文編號：1460494