本文關(guān)鍵詞： 銅綠假單胞菌 調(diào)節(jié)子 Ⅲ型分泌系統(tǒng) 致病因子 蛋白定位　出處：《西北大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：銅綠假單胞菌(Pseudomonas aerugionsa, PA)是廣泛存在于自然界中的革蘭氏陰性桿菌,它可以感染人類引起不同病癥甚至造成死亡。銅綠假單胞菌之所以普遍存在、適應(yīng)性強(qiáng)受益于其體內(nèi)有多種基因調(diào)控系統(tǒng),能快速調(diào)節(jié)基因表達(dá)以應(yīng)對外界條件變化。Gac/Rsm系統(tǒng)是銅綠假單胞菌中一個重要的基因調(diào)控系統(tǒng),其小蛋白RsmA是一種全局調(diào)控因子,調(diào)控多種致病因子的表達(dá)。本實驗室在前期篩選rsmA調(diào)控基因時,得到一個影響rsmA表達(dá)的基因PA4664 (prmC)。大腸桿菌中與PA4664同源的基因prmC是一個肽鏈釋放因子的甲基轉(zhuǎn)移酶,參與肽鏈合成的正常釋放。本課題以突變體/△PA4664為研究對象,研究了PA4664基因?qū)︺~綠假單胞菌多種表型的影響及其對相關(guān)基因調(diào)控的分子機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn),突變體△PA4664的泳動、叢動和蹭行運動均明顯降低。在突變體△PA4664中互補(bǔ)rsmA可使運動的表型恢復(fù)至野生型水平。然而,電鏡觀察突變體△PA4664中的鞭毛和菌毛并未明顯受損,說明PA4664對運動的影響并不是通過影響鞭毛和菌毛的結(jié)構(gòu),而是通過調(diào)節(jié)RsmA實現(xiàn)的。實驗發(fā)現(xiàn),除運動能力外,PA4664還影響銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)(Quorum sensing, QS)以及生物被膜的生成。在突變體△PA4664中,QS系統(tǒng)的las和rhl基因表達(dá)量都明顯降低,生物被膜多聚復(fù)合物合成量減少；突變體△PA4664胞內(nèi)c-di-GMP也降低了近一半。同時PA4664也影響菌體的致病因子,如綠膿菌素和T3SS分泌蛋白。以果蠅(Drosophila melanogaster Canton S)和中國白菜(Brassica pekinensis)為模型的致病性實驗表明,突變體/△PA4664的致病性相對于野生型有較大降低。在本研究構(gòu)建的突變體/△PA4664的互補(bǔ)體中,運動性、綠膿菌素產(chǎn)量和c-di-GMP水平等均恢復(fù)至野生型水平,進(jìn)一步證實PA4664調(diào)控作用。綜上所述,這些結(jié)果表明,PA4664是rsmA上游調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的一分子,它通過rsmA對銅綠假單胞菌的運動性等表型起重要的調(diào)控作用。本研究同時對PA4595蛋白進(jìn)行初步研究。亞細(xì)胞定位免疫印跡實驗證明PA4595蛋白屬于ATP結(jié)合盒ABC蛋白家族的REG亞家族。REG亞家族蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)中,與普通的ABC蛋白定位在生物膜上不同,不參與物質(zhì)運輸。PA4595基因突變后T3SS的分泌蛋白和調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)均升高,本研究發(fā)現(xiàn)它并不是通過vfr或者rsmA等對ExsA的調(diào)節(jié)而導(dǎo)致以上變化的。
[Abstract]:Pseudomonas aerugionsa (PA) is a gram-negative bacilli widely found in nature. Pseudomonas aeruginosa is widely found in humans because of its adaptability to a variety of gene regulatory systems. Gac / Rsm system is an important gene regulation system in Pseudomonas aeruginosa, and its small protein RsmA is a global regulatory factor. Regulation of the expression of multiple pathogenic factors. Our laboratory screening of rsmA regulatory genes in the early stage. A gene that affects the expression of rsmA was obtained. The gene prmC, which is homologous to PA4664 in E. coli, is a methyltransferase of peptide chain releasing factor. Participate in the normal release of peptide chain synthesis. In this study, the mutant / PA4664 as the research object. The effects of PA4664 gene on many phenotypes of Pseudomonas aeruginosa and the molecular mechanism of regulation of related genes were studied. In the mutant PA4664, complementary rsmA could restore the exercise phenotype to the wild-type level. Electron microscopic observation showed that the flagella and fimbriae in the mutant PA4664 were not significantly damaged, indicating that the effect of PA4664 on the movement was not by affecting the structure of the flagella and the fimbriae. The results showed that PA4664 also affected the colony sensing system of Pseudomonas aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa), Quorum sensing. QS) and biofilm formation. The expression of las and rhl genes in the QS system of mutant PA4664 was significantly decreased, and the synthesis of biofilm polycomplex was decreased. The intracellular c-di-GMP of the mutant PA4664 was reduced by nearly half, and PA4664 also affected the pathogenic factors of the bacteria. For example, Pseudomonas aeruginosa and T3SS secreted proteins. Drosophila melanogaster Canton S) and Chinese cabbage (. Brassica pekinensis is the pathogenicity of the model. The pathogenicity of mutants / PA4664 was significantly lower than that of wild type. In the mutants / PA4664 complementants constructed in this study, motility was observed. Pseudomonas aeruginosa yield and c-di-GMP level returned to the wild-type level, further confirmed the regulatory role of PA4664. In conclusion, these results show that. PA4664 is a member of rsmA upstream regulatory network. It plays an important role in regulating the motility and other phenotypes of Pseudomonas aeruginosa by rsmA. In this study, we also studied the PA4595 protein. Subcellular localization immunoblotting assay showed that PA4595. The protein belongs to the REG subfamily of the ATP binding box ABC family. The protein of the REG subfamily is located in the cytoplasm. The expression of T3SS secretory protein and regulatory protein were increased after the mutation of PA4595 gene, which was different from the normal ABC protein in biofilm. This study found that these changes were not caused by the regulation of ExsA by vfr or rsmA.
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R378

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 林曉 ,陳美云 ,林其昌 ,陳公平;222株銅綠假單胞菌藥敏結(jié)果[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2002年10期

2 王炳華;王炳云;;106株銅綠假單胞菌藥敏結(jié)果分析[J];基層醫(yī)學(xué)論壇;2004年06期

3 黃志強(qiáng);李麗君;盧娟;;肺結(jié)核病合并感染銅綠假單胞菌的藥敏分析[J];臨床肺科雜志;2010年09期

4 封尊玉;;銅綠假單胞菌的治療策略[J];海南醫(yī)學(xué);2010年21期

5 劉萍;張志倫;倪丹妮;吳杰紅;;銅綠假單胞菌產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶因素分析[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2011年23期

6 吳麗娟,熊爾陽,鄧光貴;聚合酶鏈反應(yīng)檢測銅綠假單胞菌的研究現(xiàn)狀[J];國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊;1996年06期

7 周鐵麗,曹建明;一種鑒定銅綠假單胞菌的新方法[J];陜西醫(yī)學(xué)檢驗;1997年04期

8 朱小平;78株銅綠假單胞菌藥敏結(jié)果的初步探討[J];江蘇臨床醫(yī)學(xué)雜志;1999年05期

9 孫東華,邊瑞巖,孫躍軍,王慶敏;銅綠假單胞菌污染礦泉水調(diào)查分析[J];環(huán)境與健康雜志;2000年04期

10 張文英;86株銅綠假單胞菌的耐藥調(diào)查[J];華夏醫(yī)學(xué);2000年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 方莉;許媛;黃義山;蔡燕;唐中;楊明輝;廖濤;;銅綠假單胞菌金屬β-內(nèi)酰胺酶基因的檢測[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗實驗室管理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

2 周明明;周鐵麗;李超;吳慶;陳櫟江;吳蓮鳳;彭定輝;;主動外排在銅綠假單胞菌耐藥中的作用研究[A];2009年浙江省檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

3 陳邦;王琰;茍曉峰;陳林;;嘧霉胺對銅綠假單胞菌基因的調(diào)節(jié)[A];第六屆全國化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

4 朱丹;李欣;;對亞胺培南耐藥的銅綠假單胞菌的體外藥敏分析[A];2005年浙江省呼吸系病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2005年

5 洪波;貢聯(lián)兵;;銅綠假單胞菌對亞胺培南的藥敏分析[A];第五次全國中青年檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

6 徐海茹;田彬;岳娜;胡志東;;臨床分離的銅綠假單胞菌耐藥結(jié)果分析[A];第五次全國中青年檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

7 趙書平;姜梅杰;;神經(jīng)內(nèi)科重癥監(jiān)護(hù)室銅綠假單胞菌氨基糖苷類修飾酶基因研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2008年

8 張杜超;方向群;;微重力對銅綠假單胞菌毒力影響及與肺部感染關(guān)系[A];2011年空間生命與生命起源暨航天醫(yī)學(xué)工程學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

9 李春梅;鐘曉祝;;銅綠假單胞菌醫(yī)院感染監(jiān)測分析[A];中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會消毒分會學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2010年

10 熊娟;梁麗紅;;尿液中分離出產(chǎn)紅膿素的銅綠假單胞菌[A];2012全國臨床微生物與感染免疫學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

相關(guān)重要報紙文章 前5條

1 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院 俞云松;銅綠假單胞菌耐藥全國流行[N];健康報;2008年

2 李曙平;銅綠假單胞菌 老年病房的主要致病菌[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

3 王振嶺;銅綠假單胞菌耐藥問題嚴(yán)重[N];中國醫(yī)藥報;2002年

4 天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院檢驗科 胡志東;關(guān)注銅綠假單胞菌對碳青霉烯類藥物的耐藥[N];健康報;2009年

5 ;碳青霉烯類抗生素[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張瑞琴;氟喹諾酮類藥物誘導(dǎo)銅綠假單胞菌耐藥性及分子機(jī)制的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

2 曹振輝;銅綠假單胞菌裂解性噬菌體的篩選、鑒定及應(yīng)用[D];大連理工大學(xué);2015年

3 蘇甜甜;銅綠假單胞菌鞭毛及生物膜調(diào)控蛋白FleQ和糖苷水解酶PslG的結(jié)構(gòu)與功能研究[D];山東大學(xué);2015年

4 張明亮;銅綠假單胞菌F_(190-342)-I_(21-83)基因重組鼠傷寒沙門菌的構(gòu)建及實驗免疫研究[D];吉林大學(xué);2015年

5 蔡雙啟;銅綠假單胞菌對頭孢哌酮鈉/舒巴坦鈉的耐藥變遷及差異蛋白組學(xué)和比較基因組學(xué)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

6 倪磊;銅綠假單胞菌蹭行運動和表面感知機(jī)制的研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2016年

7 張秋勤;生鮮雞肉中腐敗菌群體感應(yīng)信號分子研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

8 宋思捷;輕型鏈球菌促進(jìn)銅綠假單胞菌致病性及機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

9 張若文;燒傷病房耐碳青霉烯類銅綠假單胞菌耐藥機(jī)制及分子流行病學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2012年

10 張亞妮;谷胱甘肽與銅綠假單胞菌致病性及抗生素抗性的關(guān)系研究[D];西北大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 賈子中;黃連素對燒傷創(chuàng)面銅綠假單胞菌生物膜干預(yù)試驗及自制中藥臨床應(yīng)用觀察[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

2 王穎;新型抗耐藥革蘭氏陰性菌藥物的篩選研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

3 馬超;無機(jī)鎵化合物抗菌性能研究[D];西南交通大學(xué);2015年

4 蒲攀;林麝源銅綠假單胞菌的分離鑒定及毒力研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

5 任佳會;間接ELISA檢測林麝源銅綠假單胞菌抗體方法的建立及應(yīng)用評估[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 白文麗;林麝養(yǎng)殖場銅綠假單胞菌的分布調(diào)查及抗菌消毒藥物的篩選[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 董滿園;銅綠假單胞菌群體感應(yīng)抑制劑的分離與活性評價[D];中國海洋大學(xué);2015年

8 鄭紅達(dá);假單胞菌喹諾酮信號系統(tǒng)抑制劑的篩選與研究[D];中國海洋大學(xué);2013年

9 李鴻飛;黏液型銅綠假單胞菌耐藥特征和耐藥株相關(guān)基因型分析[D];吉林大學(xué);2016年

10 王康;銅綠假單胞菌調(diào)節(jié)蛋白VqsR、Arr及T3SS系統(tǒng)轉(zhuǎn)運蛋白PopB/D的結(jié)構(gòu)與功能研究[D];山東大學(xué);2016年

，

本文編號：1458926