本文關(guān)鍵詞：可生物降解多肽基因載體的構(gòu)建與體外評(píng)價(jià)　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)》2016年11期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的制備一種應(yīng)用于基因遞送系統(tǒng)的硫辛酸修飾的聚精氨酸多肽納米復(fù)合物,并考察其對(duì)人胚腎細(xì)胞系HEK293細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率及細(xì)胞毒性。方法以不同量的半胱氨酸作為交聯(lián)劑,合成4種不同交聯(lián)度的還原性硫辛酸修飾的交聯(lián)聚精氨酸組氨酸(LHRss),利用1 H NMR和凝膠色譜鑒定合成的LHRss。取質(zhì)粒DNA(pDNA)和LHRss以不同氮磷比(N/P)自組裝形成納米復(fù)合物,用粒度測(cè)定儀測(cè)定復(fù)合物的粒徑和zeta電位,凝膠阻滯電泳測(cè)定載體LHRss對(duì)pDNA的包裹能力。用LHRss/pDNA納米復(fù)合物與HEK293細(xì)胞共同培養(yǎng),考察不同交聯(lián)度復(fù)合物的細(xì)胞攝取情況及相關(guān)基因轉(zhuǎn)染情況,并測(cè)定不同納米復(fù)合物對(duì)HEK293細(xì)胞的細(xì)胞毒性。結(jié)果通過結(jié)構(gòu)鑒定確定LHRss多肽合成成功。組裝形成的納米復(fù)合物粒徑分布均勻,N/P≥40時(shí)LHRss3/pDNA及LHRss4/pDNA復(fù)合物的zeta電位均大于30mV。凝膠阻滯電泳結(jié)果顯示N/P值為5時(shí),LHRss3可完全包裹pDNA。當(dāng)N/P值為40時(shí),HEK293細(xì)胞對(duì)LHRss3/pDNA的攝取及轉(zhuǎn)染效率高于其他3種復(fù)合物及單體硫辛酸修飾的聚精氨酸組氨酸(LHR);其中LHRss3/pGL3復(fù)合物的平均熒光強(qiáng)度約為L(zhǎng)HR/pGL3復(fù)合物的3.98倍,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)顯示LHR/pGL3及不同交聯(lián)度LHRss/pGL3轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞24h后,細(xì)胞存活率均在80%以上,其毒性作用均低于bPEI-25K(20μg/mL bPEI-25K轉(zhuǎn)染細(xì)胞24h后細(xì)胞存活率為25%左右,P0.05)。結(jié)論制備的硫辛酸修飾的聚精氨酸多肽納米復(fù)合物有望成為一種高效的基因載體。
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院藥學(xué)部;上海市浦東新區(qū)周浦醫(yī)院藥劑科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81172514;81372762)~~
【分類號(hào)】：R450
【正文快照】： [Acad J Sec Mil Med Univ,2016,37(11):1353-1359]近年來基因治療已發(fā)展為一種非常有前景的治療方式�；蛑委熓菍⑼庠葱哉；�?qū)氚屑?xì)胞,糾正或補(bǔ)償因基因缺陷、異常引起的疾病,達(dá)到治療目的。外源基因的導(dǎo)入必須借助一定的方法或載體[1],而良好的基因載體要求材料具有

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