發(fā)布時間：2017-12-26 01:10

  本文關(guān)鍵詞：腺病毒介導(dǎo)的CSFV E0基因在奶山羊乳腺中的表達(dá)　出處：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：豬瘟(CSF)是由豬瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)引發(fā)的一種烈性傳染病,給我國以及全世界的養(yǎng)豬業(yè)都帶來了巨大的危害。目前,除了一些已經(jīng)消滅豬瘟的國家和地區(qū),防治豬瘟的主要方法仍以接種豬瘟的減毒活疫苗為主。但豬瘟在世界范圍內(nèi)的流行形式已經(jīng)發(fā)生改變,以往的兔化減毒活疫苗已經(jīng)不能完全適應(yīng)新形式下人們對豬瘟防控的新要求。此外,隨著基因工程新型疫苗技術(shù)以及外源表達(dá)重組蛋白技術(shù)的發(fā)展,探索針對豬瘟的更加安全有效的新型疫苗已經(jīng)是不可回避的趨勢。因此,本研究構(gòu)建了含有CSFV E0基因的重組腺病毒Ad-hisE0,并驗證了其在牛乳腺上皮細(xì)胞和奶山羊乳腺中的表達(dá),為研制豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗和乳腺生物反應(yīng)器奠定了基礎(chǔ)。1.含有CSFV E0基因的重組腺病毒Ad-hisE0的構(gòu)建以pMD-18T載體為模板,采用PCR技術(shù)克隆一段上游帶有信號肽和His標(biāo)簽序列的CSFV E0基因,構(gòu)建了腺病毒穿梭載體pAdTrack-CMV-hisE0。接著將其與腺病毒骨架載體pAd Easy-1重組,獲得腺病毒重組質(zhì)粒pAd-hisE0。將此重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞包裝得到重組腺病毒Ad-hisE0,對獲得的重組腺病毒進(jìn)行進(jìn)一步擴增,純化和滴度測定,獲得了高滴度的重組腺病毒。2.重組腺病毒Ad-hisE0有效性的鑒定用獲得的重組腺病毒Ad-hisE0感染HEK 293A細(xì)胞,綠色熒光蛋白的表達(dá)指示了腺病毒可以成功侵染細(xì)胞。感染48 h后,提取293A細(xì)胞的總RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,實時定量PCR檢測CSFV E0基因mRNA水平的表達(dá),結(jié)果顯示E0基因在293A細(xì)胞內(nèi)正常表達(dá)。說明獲得的重組腺病毒可以侵染細(xì)胞,并可以介導(dǎo)E0基因在細(xì)胞內(nèi)的有效表達(dá)。3.重組腺病毒Ad-hisE0在牛乳腺上皮細(xì)胞中的表達(dá)用重組腺病毒Ad-hisE0體外感染牛的乳腺上皮細(xì)胞,然后收集細(xì)胞及其上清,提取蛋白進(jìn)行CSFV E0重組蛋白的Western blot分析,結(jié)果顯示出分別位于26 kD和48 kD處兩條特異性條帶,與預(yù)期結(jié)果基本相符。表明該重組腺病毒具有侵染哺乳動物乳腺上皮細(xì)胞的能力,并且能夠成功介導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)和分泌E0蛋白。4.重組腺病毒Ad-hisE0在奶山羊乳腺中的表達(dá)用重組腺病毒Ad-hisE0通過乳腺導(dǎo)管灌注法體內(nèi)感染泌乳期山羊的乳腺,于48 h后收集山羊的乳汁,將乳汁樣品經(jīng)過處理后用于Western blot分析,結(jié)果同樣顯示了兩條特異性條帶,分別處于26 kD處和48 kD處。證實構(gòu)建的重組腺病毒Ad-hisE0可以介導(dǎo)重組融合蛋白CSFV E0在山羊乳腺中的表達(dá)和分泌。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65

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7 謝金文;沈志強;管宇;韓玲;任艷玲;曲光剛;;CSFV、PRRSV雙重RT-PCR檢測方法的建立及其應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)研討會論文集（下冊）[C];2009年

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8 牛偉;PRRSV和CSFV實時熒光定量PCR方法的建立及PRRSV M蛋白重組質(zhì)粒實驗免疫研究[D];吉林大學(xué);2012年

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2 陳玉燕;9種豬病病原體GeXP多重PCR檢測方法的研究[D];重慶理工大學(xué);2015年

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6 白雪;不同CSF免疫狀態(tài)下豬體PRRS免疫狀態(tài)及IFN-γ分泌細(xì)胞的變化特征的研究[D];吉林大學(xué);2012年

7 陳蕾;豬瘟病毒RT-LAMP快速診斷試劑盒的研制與應(yīng)用[D];中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;2009年

8 湯波;豬瘟病毒E2基因RT-PCR檢測方法的建立及病毒分子流行病學(xué)研究[D];西南大學(xué);2009年

9 程浩;豬睪丸細(xì)胞多次傳代的CSFV E2基因遺傳變異及E2蛋白在細(xì)胞中表達(dá)的研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2011年

10 陳恒;穩(wěn)定表達(dá)豬干擾素調(diào)節(jié)因子7細(xì)胞株的建立及表達(dá)產(chǎn)物轉(zhuǎn)位研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2013年

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本文編號：1335197