本文關(guān)鍵詞：β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因的克隆、表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)　出處：《食品與發(fā)酵工業(yè)》2016年11期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：獲取來自坎皮納斯類芽孢桿菌(Paenibacillus campinasensis)的編碼β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(β-cyclodextrin glycosyltransferase,β-CGTase)的基因cgt,并將帶有His-Tag去除信號(hào)肽的cgt基因克隆到表達(dá)載體p ET28a(+)后,轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá)。通過熱變性和Ni-NTA獲得重組β-CGTase純化酶,再通過SDSPAGE檢測(cè),蛋白分子量在74 k Da左右,并初步研究了重組β-CGTase的酶學(xué)性質(zhì)。結(jié)果表明:重組β-CGTase的酶促反應(yīng)的最適p H為7.0,并且在p H為5.5~10.0范圍穩(wěn)定,最適反應(yīng)溫度為為65℃,重組酶在55℃保溫5 h時(shí)仍保持90%以上的活性。研究一些金屬離子和化學(xué)試劑對(duì)重組酶的影響發(fā)現(xiàn)β-CGTase是一種金屬酶,Ca~(2+)對(duì)酶的催化起關(guān)鍵作用,尤其是在低濃度下對(duì)酶的活性有促進(jìn)作用。對(duì)重組酶的酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究得出Km為3.75 mg/m L,Vmax為0.33 mg/(min·m L)。該研究成功實(shí)現(xiàn)了β-CGTase基因的異源表達(dá),為進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)β-CGTase的工業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 長(zhǎng)江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;淮陰工學(xué)院生命科學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(21576110) 生物質(zhì)轉(zhuǎn)化與過程集成工程實(shí)驗(yàn)室開放課題(JPELBCPL2014007)
【分類號(hào)】：Q55;Q78
【正文快照】： β-環(huán)糊精(β-cyclodextrin,β-CD)是由7個(gè)D-吡喃葡萄糖基以α-1,4葡萄糖苷鍵連接成的環(huán)狀低聚糖,是一種無毒無味的白色結(jié)晶體。β-CD因內(nèi)疏水外親水特殊的筒狀結(jié)構(gòu),容易與客體形成包合物,能夠改變其性質(zhì),使其不受酶、p H、熱等外在因素的影響,從而達(dá)到保護(hù)、穩(wěn)定、增溶客體分

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