本文關(guān)鍵詞：上海某豬場大腸桿菌中mcr-1基因的傳播機(jī)制研究　出處：《華南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：近年來由于多耐藥革蘭陰性菌的廣泛流行,尤其是碳青霉烯耐藥革蘭陰性菌株的不斷出現(xiàn),使得黏菌素這一老藥被重新用于治療這些多重耐藥菌,不幸地是,黏菌素耐藥現(xiàn)象也變得越來越嚴(yán)重。多粘菌素的耐藥往往是由染色體突變造成的,而最近出現(xiàn)了質(zhì)粒介導(dǎo)的黏菌素耐藥基因mcr-1,自報(bào)道之后,mcr-1基因成為研究熱點(diǎn)。本研究對首次發(fā)現(xiàn)mcr-1基因的上海某豬場大腸桿菌進(jìn)行mcr-1基因檢測,以進(jìn)一步研究該豬場的mcr-1流行情況和傳播機(jī)制,為控制mcr-1基因的擴(kuò)散提供理論依據(jù)。對2013年7月份分離自上海市某豬場的47株大腸桿菌采用PCR方法檢測mcr-1基因,結(jié)果有27株(57.4%)多粘菌素不敏感且全部檢測到mcr-1基因,說明了該豬場大腸桿菌對黏菌素耐藥機(jī)制主要由mcr-1介導(dǎo)。采用瓊脂稀釋法測定mcr-1陽性大腸桿菌對抗菌藥的敏感性,結(jié)果表明27株mcr-1陽性菌對氨芐西林的耐藥率為77.8%(21/27),對頭孢噻肟的耐藥率為33.3%(9/27),對磷霉素的耐藥率為25.9%(7/27),對氯霉素、氟苯尼考、復(fù)方新諾明的耐藥率均達(dá)到100%,表明所有菌株都呈現(xiàn)不同程度的多重耐藥現(xiàn)象。所有陽性菌株對阿米卡星和亞胺培南均敏感。通過脈沖場凝膠電泳(PFGE)方法研究mcr-1陽性大腸桿菌間的克隆傳播關(guān)系。PFGE分型結(jié)果發(fā)現(xiàn)26株分型成功,1株分型失敗,26株分型成功的可以分為A-S這19個型,表明大部分mcr-1陽性大腸桿菌不存在克隆傳播關(guān)系。對27株mcr-1陽性大腸桿菌進(jìn)行接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)以研究質(zhì)粒的可轉(zhuǎn)移性,結(jié)果有22株成功接合,其中有2株各獲得2株不同接合子,5株多次接合均失敗。對獲得的24株接合子進(jìn)行復(fù)制子分型,分別有9、6、4、2株為IncX4、IncHI2、IncI2、IncF型質(zhì)粒,其他3株分別為IncY、IncHI2和IncY、F:2 A-B:53和IncX4型,表明攜帶mcr-1的質(zhì)粒豐富多樣。采用PCR方法檢測接合子中其他耐藥基因的攜帶情況,發(fā)現(xiàn)5株IncHI2型質(zhì)粒同時(shí)檢測到blaCTX-M-14、fosA3、oqxAB和floR,1株IncHI2型質(zhì)粒檢測到blaCTX-M-14、fosA3和floR,還有1株IncHI2型質(zhì)粒檢出blaCTX-M-15、fosA3、oqxAB和floR,說明IncHI2型質(zhì)粒往往攜帶blaCTX-M、fosA3、oqxAB和floR耐藥基因與mcr-1共同傳播。采用PCR-mapping方法對mcr-1基因上下游側(cè)翼序列進(jìn)行分析,共發(fā)現(xiàn)了3種不同類型的基因環(huán)境,其中有7株在mcr-1基因的上游檢測到了插入序列ISApl1,有6株在mcr-1的上下游均檢測到了ISApl1,其他14株在mcr-1的上下游均未測到ISApl1。對24株攜帶mcr-1基因的大腸桿菌接合子和5株陽性原菌進(jìn)行S1-PFGE并與mcr-1探針進(jìn)行Southern雜交。結(jié)果顯示,IncX4型質(zhì)粒大小約為28.8~33.3kb,IncI2型質(zhì)粒大小約為54.7~78.2kb,IncY型質(zhì)粒大小約為78.2kb,IncHI2型質(zhì)粒大小約為216.9~-244.4kb,F29型質(zhì)粒大小約為54.7kb,F53型質(zhì)粒大小約為138.9kb,未接合成功的5株原菌中有1株的mcr-1基因位于染色體上,其他均位于質(zhì)粒上,其中1株質(zhì)粒大小約為28.8~33.3kb,1株質(zhì)粒大小約為244.4~310.1kb,其他2株質(zhì)粒大小約為78.2~104.5kb。本研究結(jié)果表明,mcr-1基因在該豬場廣泛傳播,主要通過IncHI2、IncX4和IncI2型質(zhì)粒進(jìn)行傳播,攜帶mcr-1的IncHI2型質(zhì)粒往往同時(shí)攜帶blaCTX-M、fosA3、oqxAB和floR等耐藥基因共同傳播。因此,我們應(yīng)該對這個新發(fā)現(xiàn)的黏菌素耐藥基因mcr-1給予高度的重視。
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1314773