本文關(guān)鍵詞：綠色熒光蛋白為報(bào)導(dǎo)基因快速篩選重組羊痘病毒表達(dá)載體　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)》2016年01期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的利用綠色熒光蛋白(GFP)為報(bào)導(dǎo)基因,構(gòu)建通用、高度減毒的外源基因表達(dá)載體IA82△121-V。方法抽提病毒DNA,擴(kuò)增ORFV132左右同源臂,構(gòu)建穿梭質(zhì)粒p SPV-132LF-EGFP-132RF;轉(zhuǎn)染OFTu細(xì)胞,與羊痘病毒IA82△121同源重組,通過(guò)熒光信號(hào)篩選重組體IA82△121-V,PCR及測(cè)序鑒定,并經(jīng)病毒滴定、體外血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)以檢測(cè)ORFV132缺失后的功能變化。結(jié)果成功快速篩選出重組羊痘病毒IA82△121-V,初步判斷ORFV132的缺失不影響病毒體外的生長(zhǎng)復(fù)制功能,但是減輕了其毒力。結(jié)論利用G FP為報(bào)導(dǎo)基因能簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定地篩選出重組羊痘病毒,高度減毒的重組羊痘病毒IA82△121-V有望成為新一代外源基因表達(dá)載體。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)部;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81441066) 廣東省自然科學(xué)基金(S2013010014850)~~
【分類號(hào)】：R446.5
【正文快照】： 羊痘病毒(Orf virus,ORFV)是一種親上皮的副痘病毒,其宿主范圍窄,僅限于綿羊和山羊,主要感染皮膚黏膜區(qū)域,不會(huì)引起全身性病毒播散[1]。羊痘病毒IA82(OV-IA82)為1982年愛(ài)荷華洲爆發(fā)的羊痘瘡疾病中分離所得[2],其132基因(ORFV132)表達(dá)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)[3],可以與血管內(nèi)皮

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4 江楠;文明;許樂(lè)仁;;羊痘病毒致宿主細(xì)胞病變研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次人獸共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第六屆第十四次教學(xué)專業(yè)委員會(huì)論文集[C];2012年

5 劉文強(qiáng);路建彪;;羊痘病毒基因組中編碼白細(xì)胞介素-18結(jié)合蛋白[A];山東農(nóng)業(yè)微生物技術(shù)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

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8 石建平;孟日增;王偉利;肖成蕊;王振國(guó);;羊痘病毒P32蛋白為抗原的間接ELISA診斷方法的建立[A];吉林省畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2007學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

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4 馬維民;羊痘病毒結(jié)構(gòu)蛋白P32基因的克隆及其在大腸埃希氏菌中的表達(dá)[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

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8 蘆曉立;羊痘病毒P32基因與羊CD58基因共表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其表達(dá)產(chǎn)物免疫活性分析[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

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