發(fā)布時(shí)間：2017-12-14 13:34

  本文關(guān)鍵詞：胭脂魚(yú)IgM重鏈基因克隆與表達(dá)分析

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【摘要】：目的認(rèn)識(shí)胭脂魚(yú)IgM的結(jié)構(gòu)與功能,研究其免疫應(yīng)答規(guī)律。方法通過(guò)同源克隆和RACE技術(shù)構(gòu)建胭脂魚(yú)IgMμcDNA全長(zhǎng),重組表達(dá)恒定區(qū)序列并制備抗血清,分別從mRNA水平和蛋白水平檢測(cè)胭脂魚(yú)IgM各組織及發(fā)育早期的表達(dá)情況;利用抗血清探究經(jīng)滅活嗜水氣單胞菌免疫后胭脂魚(yú)IgM免疫應(yīng)答規(guī)律。結(jié)果獲得胭脂魚(yú)IgμcDNA全序列,長(zhǎng)2028 bp,編碼580 aa,重組表達(dá)IgMμCH_(1-4)區(qū),獲得相對(duì)分子質(zhì)量約45 000的重組蛋白,成功制備rIgM多抗,免疫印跡分析可見(jiàn),anti-rIgM抗血清能夠特異性識(shí)別rIgM和胭脂魚(yú)血清IgM;各組織RT-PCR結(jié)果表明,被檢測(cè)組織除肌肉、皮膚和心臟外均有IgM表達(dá);發(fā)育各時(shí)期RT-PCR結(jié)果顯示,胭脂魚(yú)卵中含有IgM轉(zhuǎn)錄本,出膜第30天可明顯檢測(cè)到IgM表達(dá)。Western blot檢測(cè)結(jié)果表明,免疫相關(guān)組織IgM含量均較高,心臟、皮膚未檢測(cè)到IgM轉(zhuǎn)錄本,卻含有大量的IgM蛋白,腦和肌肉始終未檢測(cè)到IgM蛋白。滅活嗜水氣單胞菌免疫實(shí)驗(yàn)表明,胭脂魚(yú)在初次免疫第21天菌特異性IgM滴度有明顯變化,加強(qiáng)免疫后迅速升高,并在最高滴度維持2個(gè)月后緩慢降低。結(jié)論成功獲得瀕危物種胭脂魚(yú)IgMμcDNA全序列及anti-IgM多克隆抗體,為胭脂魚(yú)免疫球蛋白結(jié)構(gòu)分析、免疫監(jiān)測(cè)及抗原診斷提供有力工具。
【作者單位】： 西南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院三峽庫(kù)區(qū)生態(tài)環(huán)境教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：西南大學(xué)基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專(zhuān)項(xiàng)基金(XDJK2012C082) 公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專(zhuān)項(xiàng)(201203086)
【分類(lèi)號(hào)】：S917.4;Q78
【正文快照】： 胭脂魚(yú)(Myxocyprinus asiaticus)隸屬于鯉形目(Cypriniformes)胭脂魚(yú)科(Catostomidae),該魚(yú)體型別致、色彩絢麗、游動(dòng)文靜,被譽(yù)為“亞洲美人魚(yú)”,分布僅見(jiàn)于我國(guó)的長(zhǎng)江和閩江,具有極高的觀賞價(jià)值和重要的科學(xué)價(jià)值[1-4]。自然狀態(tài)下,胭脂魚(yú)的胚胎發(fā)育期長(zhǎng),繁殖率低[2],加之近年

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