本文關(guān)鍵詞：藤茶類黃酮合成相關(guān)基因的克隆與表達(dá)分析

  更多相關(guān)文章： 藤茶 二氫楊梅素 基因表達(dá) 熒光定量 相關(guān)性

【摘要】：藤茶(Ampelopsis grossedentata W.T.Wang),系葡萄科蛇葡萄屬的藤本植物,其莖葉富含二氫楊梅素(dihydromyricetin, DMY)等黃酮類化合物,可以加工成保健茶,具有清熱解毒、消炎、抗氧化、保肝護(hù)肝和增強(qiáng)免疫力等多種功效。本文從藤茶中克隆了5個(gè)類黃酮合成相關(guān)基因,并對(duì)適于實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)的內(nèi)參基因進(jìn)行篩選。然后分析了類黃酮合成相關(guān)基因在藤茶葉片不同發(fā)育時(shí)期、不同器官組織中的表達(dá)水平及其與DMY含量的相關(guān)性,以期為闡明藤茶DMY高含量形成的分子機(jī)理提供基礎(chǔ)信息。主要結(jié)果如下：1、檢測(cè)了Actin、18s-rRNA、GAPDH, a-tubulin、β-tubulin和UBQ等6個(gè)常見(jiàn)管家基因在藤茶中的表達(dá)情況,并使用geNorm、NormFinder和BestKeeper軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果表明,當(dāng)比較不同器官組織的基因表達(dá)時(shí),Actin、 18s-rRNA和GAPDH的穩(wěn)定性較好；當(dāng)比較葉片不同發(fā)育時(shí)期的基因表達(dá)時(shí),18s-rRNA、GAPDH和α-Tubulin的穩(wěn)定性較好。綜合考慮,本文選取18s-rRNA作為內(nèi)參基因。2、采用同源克隆技術(shù),從藤茶葉片中克隆了5個(gè)類黃酮合成相關(guān)基因：AgPAL、AgC4H、Ag4CL、AgCHS和AgCHI,其開放閱讀框長(zhǎng)度分別為2133bp、 1518bp、1713bp、1182bp和717bp,經(jīng)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)BLAST分析,這5個(gè)基因推導(dǎo)的氨基酸序列與葡萄、白樺、金銀花和柑橘等其他物種具有較高的同源性(77%-96%)。3、qRT-RCR結(jié)果表明,在藤茶葉片不同發(fā)育時(shí)期,AgPAL、AgC4H、Ag4CL、 AgF3H的表達(dá)量在前三葉中隨著葉片的成熟度增加而下降,第四葉中表達(dá)量上升；AgF3'H的表達(dá)量第一葉和第二葉的表達(dá)量呈現(xiàn)遞減的狀態(tài),第三葉和第四葉的表達(dá)量呈現(xiàn)增加；AgCHS、AgF3'5'H的表達(dá)量均為第一葉最高,第二葉到第四葉的表達(dá)量并無(wú)明顯變化；而AgCHI、AgDFR和的表達(dá)量從第一葉到第四葉沒(méi)有明顯變化。對(duì)于不同器官,AgPAL和AgDFR在幼根中表達(dá)量最高,其次是葉和嫩莖；Ag4CL、AgCHS和AgF3'5'H在幼根和嫩莖中基本不表達(dá),只有在葉片中表達(dá)；AgC4H、AgCHI、AgF3H和AgF3'H在葉片中表達(dá)量最高,其次是幼根,在嫩莖中表達(dá)量最低。4、利用HPLC技術(shù),測(cè)定了藤茶不同時(shí)期、不同器官中的DMY含量,結(jié)果表明,在葉片不同發(fā)育時(shí)期,DMY含量隨著葉片的成熟度增加而下降,即第一葉第二葉第三葉第四葉。而對(duì)于不同組織器官中,DMY在幼根中基本不含有,而在葉中含量最高,嫩莖中含量次之。5、對(duì)藤茶葉片不同發(fā)育時(shí)期和不同組織器官中的DMY含量與類黃酮合成基因的表達(dá)量進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果表明,對(duì)于葉片不同發(fā)育時(shí)期：AgPAL、 AgC4H、Ag4CL、AgCHS、AgF3H、和AgF3'5'H的基因表達(dá)量越高,其DMY含量越高,與DMY關(guān)系較大；對(duì)于不同器官,隨著AgPAL和AgDFR表達(dá)量增高,DMY含量在降低,因此,AgPAL和AgDFR的表達(dá)對(duì)于不同器官中的DMY呈負(fù)調(diào)控。
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：Q943.2

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 唐瑛;羅有祖;楊李;王曉昆;邱煒;;藤茶總黃酮對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠的影響[J];中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志;2010年10期

2 陳云英，張永田;藤茶──福建的天然保健飲品(簡(jiǎn)報(bào))[J];亞熱帶植物通訊;1995年01期

3 王定勇;藤茶甙的分離和結(jié)構(gòu)確定[J];漳州師范學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1999年04期

4 索朗 ,齊云 ,吳彬 ,尚偉芬;藤茶抗炎、鎮(zhèn)痛作用研究[J];西藏科技;2003年03期

5 劉建新,周天達(dá);藤茶的生藥學(xué)研究[J];中草藥;1999年06期

6 鐘正賢,陳學(xué)芬,周桂芬,袁阿興;廣西產(chǎn)藤茶總黃酮的藥理研究(英文)[J];廣西科學(xué);1999年03期

7 成鳳桂,歐知義;鄂西藤茶中總黃酮的提取及含量測(cè)定[J];中南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2005年02期

8 王華夫,游小清;藤茶中香氣組成的氣相色譜測(cè)定[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);1996年04期

9 歐賢紅;葉勇;黃秋潔;劉華鋼;宋云飛;;藤茶抗氧化活性研究[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2013年02期

10 鄭成;曾劍輝;顧采琴;韋星船;;保健藤茶飲料的研制[J];廣州大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年06期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 黃鋼;鄔建國(guó);張曉昱;;藤茶風(fēng)味生物轉(zhuǎn)化研究[A];2012年鄂粵微生物學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)——湖北省暨武漢微生物學(xué)會(huì)成立六十年慶祝大會(huì)論文集[C];2012年

2 鐘正賢;周桂芬;陳學(xué)芬;覃潔萍;;藤茶總黃酮的實(shí)驗(yàn)研究[A];2004年中國(guó)西部藥學(xué)論壇論文匯編（上冊(cè)）[C];2004年

3 周春權(quán);姚欣;陳曉明;倪峰;;藤茶提取物的超聲提取及含量測(cè)定[A];第十一屆全國(guó)中藥藥理學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要[C];2010年

4 陳勝璜;雷鳳蓮;;比色法測(cè)定藤茶中總黃酮的含量[A];中國(guó)自然資源學(xué)會(huì)全國(guó)第四屆天然藥物資源學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2000年

5 張世仙;曾啟華;敖克厚;金茜;楊秀;;苯酚-硫酸法測(cè)定低碳食療植物藤茶多糖含量的研究[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第十七屆全國(guó)有機(jī)分析與生物分析學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2013年

6 楊子明;楊秀芬;;藤茶對(duì)大鼠肝組織內(nèi)CYP和GST、UGT活性的影響[A];第十二次全國(guó)臨床藥理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議會(huì)議論文集[C];2010年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 記者 鄧華 通訊員 譚紹權(quán) 邱安;來(lái)鳳藤茶參項(xiàng)目納入國(guó)家農(nóng)業(yè)綜合開發(fā)重點(diǎn)項(xiàng)目[N];恩施日?qǐng)?bào);2006年

2 本報(bào)記者 張萍;“武陵藤”貴州藤茶亮相銅仁[N];銅仁日?qǐng)?bào);2010年

3 何建成;江口藤茶：如何實(shí)現(xiàn)持續(xù)供給?[N];銅仁日?qǐng)?bào);2010年

4 趙玉德 記者 江躍華;北京一機(jī)構(gòu)投資4000萬(wàn)與江口共建生態(tài)藤茶基地[N];經(jīng)濟(jì)信息時(shí)報(bào);2012年

5 王松岳;藤茶[N];中國(guó)花卉報(bào);2005年

6 本報(bào)記者 雷萌;山間小藤葉 一番大事業(yè)[N];中華合作時(shí)報(bào);2010年

7 本報(bào)記者 張勇;武陵牌“貴州藤茶”獲QS認(rèn)證[N];銅仁日?qǐng)?bào);2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 何桂霞;藤茶活性成分的分離鑒定及藥理作用研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

2 陳玉瓊;藤茶中黃酮、二氫楊梅素的提取分離、降血脂作用及藤茶安全評(píng)價(jià)的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 潘慧敏;藤茶改善胰島素抵抗的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

2 伊恒杰;藤茶類黃酮合成相關(guān)基因的克隆與表達(dá)分析[D];福建農(nóng)林大學(xué);2016年

3 張學(xué)娟;藤茶的形態(tài)學(xué)、生物學(xué)特性及主要化學(xué)成分研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

4 李安琪;施肥對(duì)藤茶品質(zhì)的影響及其主要活性成分黃酮的提取、純化研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

5 鄧?guó)P玲;藤茶參膠囊的藥學(xué)研究[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2009年

6 王婉瑩;藤茶傳統(tǒng)藥物學(xué)及抗氧化活性的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

7 李翠朵;發(fā)酵法提取藤茶中活性成分的研究[D];大連工業(yè)大學(xué);2011年

8 孟燕;藤茶中二氫楊梅素的純化及金屬配合物的初步研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

9 曾維超;藤茶加工新工藝的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

10 崔曉燕;藤茶的抗炎、免疫調(diào)節(jié)作用相關(guān)藥理學(xué)研究[D];沈陽(yáng)藥科大學(xué);2006年

，

本文編號(hào)：1244411