本文關(guān)鍵詞：關(guān)鍵基因的修飾對枯草芽孢桿菌尿苷合成的影響

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【摘要】：【目的】探究磷酸核糖焦磷酸(PRPP)合成酶(prs)和氨甲酰磷酸合成酶(pyr AA/pyr AB)的點突變,以及異源5′-核苷酸酶(sdt1)的過表達,對枯草芽孢桿菌尿苷生物合成的影響�！痉椒ā恳罁�(jù)推斷的變構(gòu)位點,分別在prs基因和pyr AB基因編碼序列中引入點突變;將點突變的prs基因在染色體xyl R位點整合表達,pyr AB基因則在染色體原位被修飾;sdt1基因在染色體sac B位點整合過表達。通過對重組菌搖瓶發(fā)酵液中尿苷、胞苷和尿嘧啶的分析,表征相關(guān)基因修飾對尿苷合成的影響�！窘Y(jié)果】在PRPP合成酶中引入Asn120Ser、Leu135Ile和Glu52Gly或Val312Ala點突變,分別導(dǎo)致尿苷積累量提高67%和96%。進一步在氨甲酰磷酸合成酶中引入Ser948Phe、Thr977Ala和Lys993Ile點突變,導(dǎo)致尿苷積累量又增加了182%,達到6.97 g/L。在此基礎(chǔ)上,過表達異源5′-核苷酸酶,導(dǎo)致尿苷產(chǎn)量增加17%,達到8.16 g/L�！窘Y(jié)論】PRPP合成酶和氨甲酰磷酸合成酶的酶活或反饋抑制調(diào)節(jié)機制,是限制尿苷過量合成的重要因素。PRPP合成酶的Asn120Ser和Leu135Ile點突變,以及氨甲酰磷酸合成酶的Ser948Phe、Thr977Ala和Lys993Ile點突變,能夠顯著促進尿苷合成。PRPP合成酶附加的Glu52Gly或Val312Ala點突變,有利于尿苷合成。異源的嘧啶專一性5′-核苷酸酶的引入,也對尿苷的合成有明顯的促進作用。
【作者單位】： 天津大學(xué)化工學(xué)院系統(tǒng)生物工程教育部重點實驗室;天津科技大學(xué)生物工程學(xué)院代謝控制發(fā)酵技術(shù)國家地方聯(lián)合工程實驗室;
【基金】：國家“863計劃”項目(2012AA02A701)~~
【分類號】：Q936;Q78
【正文快照】： 尿苷(Uridine)化學(xué)名為1-β-D-呋喃核糖苷尿嘧啶,作為合成某些抗病毒或抗腫瘤藥物的原料,在制藥工業(yè)中有一定的需求[1]�？莶菅挎邨U菌(Bacillus subtilis)具有嘧啶核苷酸從頭合成途徑,以及以尿苷單磷酸(UMP)為前體物的尿苷生物合成途徑[2](圖1)。但野生型B.subtilis在一般培養(yǎng)

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本文編號：1236851