本文關鍵詞：金鐵鎖鯊烯環(huán)氧酶基因的克隆與表達

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【摘要】：目的:從金鐵鎖Psammosilene tunicoides W.C.Wu et C.Y.Wu中克隆三萜皂苷合成途徑中的關鍵酶鯊烯環(huán)氧酶(squalene epoxidase,SE)基因,并進行生物信息學和表達分析。方法:在轉錄組數(shù)據(jù)分析的基礎上,利用RTPCR方法獲得金鐵鎖SE基因的兩個克隆的全長c DNA序列及進行生物信息學分析;并進行Real-time PCR實驗,測定SE在不同組織中的表達量。結果:得到2條SE c DNA,SE-1全長1 642 bp,開放閱讀框1 578 bp,編碼525個氨基酸;SE-2全長1 552 bp,開放閱讀框1 446 bp,編碼481個氨基酸;構建了p EASY-E1-SE-1及p EASY-E1-SE-2重組質(zhì)粒,獲得穩(wěn)定的原核表達體系,SDS-PAGE結果表明所表達的蛋白與預測的蛋白大小一致。Real-time PCR結果表明SE-1、SE-2基因在根中的表達量均高于莖和葉。結論:從金鐵鎖中成功克隆了SE基因,可為進一步研究金鐵鎖中三萜皂苷合成代謝途徑及其關建酶表達模式奠定基礎。
【作者單位】： 云南中醫(yī)學院;
【分類號】：282.71
【正文快照】： 稀有瀕危物種金鐵鎖Psammosilene tunicoidesW.C.Wu et C.Y.Wu為石竹科單型屬植物〔1〕,以根入藥,是“云南白藥”的主要組成藥之一,主治跌打損傷、風濕痛、癰疽瘡癤、創(chuàng)傷出血等癥〔2〕,主要有效成分為金鐵鎖三萜總皂苷〔3〕。MVA途徑是植物體內(nèi)皂苷合成的主要途徑,在其生物合

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