本文關(guān)鍵詞：金鐵鎖鯊烯環(huán)氧酶基因的克隆與表達(dá)

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【摘要】：目的:從金鐵鎖Psammosilene tunicoides W.C.Wu et C.Y.Wu中克隆三萜皂苷合成途徑中的關(guān)鍵酶鯊烯環(huán)氧酶(squalene epoxidase,SE)基因,并進(jìn)行生物信息學(xué)和表達(dá)分析。方法:在轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析的基礎(chǔ)上,利用RTPCR方法獲得金鐵鎖SE基因的兩個克隆的全長c DNA序列及進(jìn)行生物信息學(xué)分析;并進(jìn)行Real-time PCR實(shí)驗(yàn),測定SE在不同組織中的表達(dá)量。結(jié)果:得到2條SE c DNA,SE-1全長1 642 bp,開放閱讀框1 578 bp,編碼525個氨基酸;SE-2全長1 552 bp,開放閱讀框1 446 bp,編碼481個氨基酸;構(gòu)建了p EASY-E1-SE-1及p EASY-E1-SE-2重組質(zhì)粒,獲得穩(wěn)定的原核表達(dá)體系,SDS-PAGE結(jié)果表明所表達(dá)的蛋白與預(yù)測的蛋白大小一致。Real-time PCR結(jié)果表明SE-1、SE-2基因在根中的表達(dá)量均高于莖和葉。結(jié)論:從金鐵鎖中成功克隆了SE基因,可為進(jìn)一步研究金鐵鎖中三萜皂苷合成代謝途徑及其關(guān)建酶表達(dá)模式奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 云南中醫(yī)學(xué)院;
【分類號】：282.71
【正文快照】： 稀有瀕危物種金鐵鎖Psammosilene tunicoidesW.C.Wu et C.Y.Wu為石竹科單型屬植物〔1〕,以根入藥,是“云南白藥”的主要組成藥之一,主治跌打損傷、風(fēng)濕痛、癰疽瘡癤、創(chuàng)傷出血等癥〔2〕,主要有效成分為金鐵鎖三萜總皂苷〔3〕。MVA途徑是植物體內(nèi)皂苷合成的主要途徑,在其生物合

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