本文關(guān)鍵詞：人源抗狂犬病毒糖蛋白Ⅲ號表位鏈置換基因工程抗體研究

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【摘要】：為獲得針對狂犬病毒糖蛋白Ⅲ號表位的人源單抗,本研究采用噬菌體展示平臺,對一株狂犬病毒糖蛋白Ⅲ號抗原表位的人源單抗CR4098采用鏈置換法進行改造。以CR4098單鏈抗體為骨架,從狂犬疫苗接種者外周血分離淋巴細胞,提核酸逆轉(zhuǎn)錄,PCR擴增抗體輕鏈可變區(qū)基因,替換CR4098的輕鏈基因,構(gòu)建輕鏈置換文庫。經(jīng)純化狂犬病毒aG株富集篩選,以上述篩選出的輕鏈陽性克隆為骨架,構(gòu)建重鏈置換抗體庫,富集篩選后通過ELISA和IFA鑒定陽性抗體克隆并進行序列測定。利用IgG表達載體VH/VK雙質(zhì)粒系統(tǒng)瞬時轉(zhuǎn)染293T細胞實現(xiàn)IgG抗體的分泌型表達,通過親和力測定和中和試驗鑒定IgG抗體功能。結(jié)果顯示,通過輕鏈置換,我們獲得14株抗狂犬病毒scFv抗體,通過ELISA、IFA、親和力測定及中和試驗確定人源抗體RV3A5特異性結(jié)合狂犬病毒糖蛋白,對狂犬病毒CVS株和aG株均具有良好的中和活性,親和力達到2.8×10-9 M。通過競爭ELISA對抗體結(jié)合表位進行鑒定,結(jié)果表明RV3A5特異性識別糖蛋白Ⅲ號抗原表位。通過鏈置換法成功獲得1株全新的針對狂犬病毒糖蛋白Ⅲ號表位的高親和力人源中和抗體,為狂犬病毒抗體制劑雞尾酒治療奠定了基礎。
【作者單位】： 中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所衛(wèi)生部醫(yī)學病毒和病毒病重點實驗室;
【基金】：重大新藥創(chuàng)制“應急抗體藥物研發(fā)技術(shù)平臺”(2013ZX09304103001006)
【分類號】：R373.9
【正文快照】： 狂犬病(Rabies)是由狂犬病毒(Rabies virus,RV)引起的急性傳染病[1],狂犬病毒基因組編碼5種主要蛋白(L、N、G、M1和M2),其中糖蛋白(G)是病毒與宿主細胞結(jié)合的配體,能誘導機體產(chǎn)生中和抗體,主要有I、II和III號中和性抗原位點[2]。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的處理原則,III級暴

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本文編號：1202428