本文關(guān)鍵詞：高表達(dá)NDRG2基因?qū)θ烁伟┘?xì)胞HepG2 EMT的影響

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【摘要】：目的:觀察高表達(dá)NDRG2基因?qū)θ烁伟〩ep G2細(xì)胞EMT(epithelial mesenchymal transition,上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化)的影響,并探討其機(jī)制是否與抑制Stat3/Twist信號通路軸相關(guān)。方法:(1)以HepG2為研究對象,根據(jù)既往文獻(xiàn)資料用100ng/mL濃度的EGF(人表皮生長因子)處理HepG2細(xì)胞;利用光學(xué)倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),證實EGF確實能夠成功誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞發(fā)生EMT;(2)構(gòu)建PEGFP-NDRG2及PEGFP-C2對應(yīng)空載體;(3)用PEGFP-NDRG2及PEGFP-C2空載體分別轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞,并通過倒置熒光顯微鏡、RT-PCR及Western-bolt檢測是否轉(zhuǎn)染成功;(4)該實驗分為四組:PEGFP-NDRG2、PEGFP-C2、轉(zhuǎn)染試劑組及空白組。轉(zhuǎn)染后各組均加入EGF持續(xù)刺激細(xì)胞36小時,Western-Blot方法檢測各組P-Stat3蛋白表達(dá)情況變化;(5)RT-PCR方法檢測轉(zhuǎn)染各組Stat3、Twist、E-Cadherin mRNA表達(dá)情況變化。結(jié)果:(1)用EGF處理HepG2細(xì)胞:用100ng/mL濃度的EGF處理HepG2細(xì)胞24小時后在倒置熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞,細(xì)胞出現(xiàn)明顯的形態(tài)學(xué)改變,出現(xiàn)上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化,發(fā)生EMT現(xiàn)象。(2)成功構(gòu)建PEGFP-NDRG2載體及對應(yīng)空載體PEGFP-C2并成功轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞。構(gòu)建載體后測序結(jié)果證實成功構(gòu)建,用PEGFP-NDRG2質(zhì)粒及空白質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后,倒置熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞,顯示綠色熒光顯示成功轉(zhuǎn)染了Hep G2細(xì)胞,計算轉(zhuǎn)染率大于70%。RT-PCR方法及Western-blot實驗均顯示轉(zhuǎn)染PEGFP-NDRG2載體后細(xì)胞中NDRG2 mRNA與蛋白表達(dá)水平均較空白質(zhì)粒組及轉(zhuǎn)染試劑組上調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)證明轉(zhuǎn)染及構(gòu)建載體成功。而轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒組與空白組相比,NDRG2的mRNA水平及蛋白表達(dá)水平均無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。(3)轉(zhuǎn)染PEGFP-NDRG2載體對Stat3/Twist/E-Cadherin信號通路的影響。轉(zhuǎn)染成功后4組均加入EGF處理36小時,用RT-PCR方法檢測各組Stat3、Twist及E-Cadherin mRNA水平變化。RT-PCR顯示4組之間Stat3mRNA水平無明顯改變,轉(zhuǎn)染NDRG2基因組較其余3組Twist mRNA水平下降,而E-Cadherin mRNA水平高于其余3組。Western-bolt顯示PEGFP-NDRG2轉(zhuǎn)染組P-stat3蛋白表達(dá)水平低于其余3組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)高表達(dá)NDRG2基因可以抑制肝癌細(xì)胞EMT現(xiàn)象發(fā)生;(2)高表達(dá)NDRG2基因抑制肝癌細(xì)胞EMT現(xiàn)象可能是通過抑制Stat3/Twist信號通路軸發(fā)揮作用。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1202598