本文關(guān)鍵詞：葡萄穗霉中β-甘露聚糖酶基因在黑曲霉中的表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)

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【摘要】：【目的】以黑曲霉(Aspergillus niger)為宿主菌來表達(dá)葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)中的β-甘露聚糖酶(β-mannanase)基因�！痉椒ā客ㄟ^對(duì)葡萄穗霉全基因組進(jìn)行比對(duì)分析,獲得編碼β-甘露聚糖酶基因s16942和s331的序列信息,通過設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增得到基因s16942和s331,連接到載體pGm上,并轉(zhuǎn)化到黑曲霉中,獲得的轉(zhuǎn)化子經(jīng)過amdS二篩平板復(fù)篩,測(cè)序驗(yàn)證,得到高效表達(dá)此基因的工程菌株G1-pGm-s16942和G1-pGm-s331�！窘Y(jié)果】SDS-PAGE檢測(cè)結(jié)果顯示,G1-pGm-s16942和G1-pGm-s331表達(dá)的蛋白分子量大小分別約為48 kDa和60 kDa,且陰性對(duì)照中沒有此條帶。粗酶液的酶學(xué)性質(zhì)表明,G1-p Gm-s16942表達(dá)的β-甘露聚糖酶的最適反應(yīng)溫度為60°C,最適反應(yīng)pH為7,粗酶液的酶活最高達(dá)521 U/mL;G1-p Gm-s331表達(dá)的β-甘露聚糖酶的最適反應(yīng)溫度為50°C,最適反應(yīng)pH為7,粗酶液的酶活最高達(dá)84 U/mL。【結(jié)論】本研究首次將葡萄穗霉的β-甘露聚糖酶基因轉(zhuǎn)化到黑曲霉中并成功表達(dá),并且具有較高的活性。
【作者單位】： 天津科技大學(xué)生物工程學(xué)院;中國科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所;
【基金】：天津市科技計(jì)劃項(xiàng)目(14ZCZDSY00065)~~
【分類號(hào)】：Q78;Q936
【正文快照】： β-甘露聚糖酶(β-mannanase EC 3.2.1.78)是一類能夠水解含有甘露糖苷鍵的甘露聚糖(包括葡甘露聚糖和半乳甘露聚糖等異甘露聚糖)的半纖維素內(nèi)切水解酶,以內(nèi)切方式降解β-D-1,4-吡喃甘露糖苷鍵,降解產(chǎn)物的非還原末端為甘露糖[1],其主要水解產(chǎn)物為單糖、二糖、三糖、四糖等低聚

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3 朱R，

本文編號(hào)：1202384