本文關(guān)鍵詞：β片層阻斷肽H102對(duì)AD轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白的影響

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【摘要】：目的:通過(guò)研究β片層阻斷肽H102對(duì)APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠腦內(nèi)NF-κB通路相關(guān)蛋白和i NOS、cleaved caspase-3及BACE1蛋白活性及表達(dá)的影響,探究NF-κB通路在AD轉(zhuǎn)基因模型小鼠腦內(nèi)的變化及β片層阻斷肽H102是否可能通過(guò)對(duì)NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白的影響來(lái)發(fā)揮對(duì)阿爾茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)的治療作用。方法:選用8周齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因雄性AD模型小鼠30只,隨機(jī)分為模型組和給藥組,每組15只;另選同周齡同背景的C57BL/6J雄性小鼠15只設(shè)為對(duì)照組。給藥組小鼠每日經(jīng)鼻腔給予H102溶液(5.8 mg/kg)5μl,對(duì)照組和模型組小鼠每日給予等量空白輔料溶液。給藥16周后,采用Morris水迷宮檢測(cè)小鼠的空間參考記憶的變化,主要包括定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)兩個(gè)部分。行為學(xué)檢測(cè)后,麻醉、灌注、冰上取腦,一側(cè)的腦組織分離皮層和海馬后于-80℃凍存。將另一側(cè)腦組織放入4%多聚甲醛溶液內(nèi)固定,之后進(jìn)行蠟塊包埋切片。采用免疫組織化學(xué)方法和免疫印跡技術(shù)測(cè)定小鼠腦組織內(nèi)Aβ1-42、p-IKK、IKK、p-NF-κB、NF-κB、p-IκB、IκB、i NOS、cleaved caspase-3和BACE1蛋白的表達(dá)。結(jié)果:(1)Morris水迷宮測(cè)試定位航行實(shí)驗(yàn):模型組逃避潛伏期均長(zhǎng)于對(duì)照組,第2天起給藥組小鼠的逃避潛伏期較模型組顯著縮短(均P0.05),給藥組除第1天和第4天外,與對(duì)照組小鼠的逃避潛伏期無(wú)顯著性差異(P0.05)�？臻g探索實(shí)驗(yàn):以目標(biāo)象限停留時(shí)間、跨越隱形平臺(tái)次數(shù)和中心活動(dòng)時(shí)間作為分析小鼠記憶能力的指標(biāo)。與對(duì)照組小鼠相比,模型組跨越隱形平臺(tái)次數(shù)和目標(biāo)象限停留時(shí)間以及中心活動(dòng)時(shí)間顯著低于對(duì)照組(均P0.05),給藥組小鼠跨越隱形平臺(tái)次數(shù)和目標(biāo)象限停留時(shí)間以及中心活動(dòng)時(shí)間顯著高于模型組(均P0.05)。模型組小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力較對(duì)照組顯著降低,給藥組較模型組顯著提高(均P0.05)。(2)免疫組化及免疫印跡檢測(cè)免疫組化染色結(jié)果:與對(duì)照組相比,模型組小鼠腦內(nèi)Aβ1-42的染色較深,蛋白表達(dá)顯著高于對(duì)照組(P0.05);與模型組相比,給藥組小鼠腦內(nèi)Aβ1-42的染色較淺,蛋白表達(dá)顯著低于模型組(P0.05)。p-IKK、p-NF-κB和p-IκB蛋白存在于細(xì)胞胞漿和胞核,對(duì)照組胞內(nèi)著色較淺,p-IKK、p-NF-κB和p-IκB蛋白累積光密度值較低;模型組胞內(nèi)著色深,蛋白表達(dá)高于對(duì)照組,給藥組胞內(nèi)著色較淺,蛋白表達(dá)較模型組顯著降低(均P0.05)。NF-κB蛋白存在于細(xì)胞胞核和胞漿內(nèi),在海馬區(qū)對(duì)照組胞內(nèi)著色較淺,NF-κB蛋白累積光密度值較低,模型組胞內(nèi)著色深,蛋白表達(dá)高于對(duì)照組,給藥組胞內(nèi)著色較淺,蛋白表達(dá)較模型組顯著降低(均P0.05);在皮層區(qū)三組染色差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。i NOS和cleaved caspase-3主要存在于胞漿,對(duì)照組胞漿著色較淺,i NOS和cleaved caspase-3蛋白累積光密度值較低;模型組胞漿著色深,蛋白表達(dá)高于對(duì)照組,給藥組胞漿著色較淺,蛋白表達(dá)較模型組顯著降低(均P0.05)。BACE1主要存在于胞膜,對(duì)照組胞膜著色較淺BACE1蛋白累積光密度較低;模型組胞膜著色深,蛋白表達(dá)高于對(duì)照組,給藥組胞膜著色較淺,蛋白表達(dá)較模型組顯著降低(均P0.05)。免疫印跡結(jié)果:與對(duì)照組相比,模型組小鼠腦內(nèi)p-IKK、p-NF-κB、p-IκB、i NOS、cleaved caspase-3、BACE1和核內(nèi)NF-κB蛋白表達(dá)均高于對(duì)照組(P0.01),給藥組顯著低于模型組(P0.05)。IKK總蛋白在三組小鼠腦內(nèi)表達(dá)無(wú)顯著性差異(P0.05);與對(duì)照組相比,模型組小鼠腦內(nèi)IκB蛋白表達(dá)低于對(duì)照組(P0.05),給藥組高于模型組(P0.05)。結(jié)論:在APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠腦內(nèi)NF-κB信號(hào)通路被過(guò)度激活;β片層阻斷肽H102可抑制APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠腦內(nèi)NF-κB信號(hào)通路的過(guò)度激活,顯著降低i NOS、cleaved caspase-3和BACE1的表達(dá),明顯改善APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R749.16

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