本文關(guān)鍵詞：農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化在水稻基因工程育種中的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動中國西部經(jīng)濟(jì)與社會發(fā)展——2011年中國遺傳學(xué)會大會論文摘要匯編》2011年

農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化甘蔗系統(tǒng)優(yōu)化

羅瓊  姚麗  吳才文  朱禎  曾千春  

【摘要】：高光效C4作物甘蔗是重要的糖料和能源植物,其復(fù)雜的遺傳背景導(dǎo)致傳統(tǒng)方法改良甘蔗品種十分困難。農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化甘蔗可以較快地改良甘蔗的單一性狀,但轉(zhuǎn)化效率低獲得可穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)化體相對較少。我們對該技術(shù)的一些改進(jìn)提高了總體轉(zhuǎn)化效率。首先將玉米核基質(zhì)結(jié)合序列MAR添加在目標(biāo)基因表達(dá)盒兩側(cè),形成MAR-gene-MAR結(jié)構(gòu),以克服轉(zhuǎn)基因的位置效應(yīng)。nptⅡ為篩選標(biāo)記,G418或巴龍霉素等抗生素篩選;混合菌液法準(zhǔn)備浸染液;添加半胱氨酸等抗氧化劑對未成熟心葉或分生組織切段預(yù)處理后再農(nóng)桿菌浸染;培養(yǎng)基中添加5.0μMCuSO_4,弱光照處理等提高甘蔗胚性愈傷組織和再生植株效率。在優(yōu)化農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化甘蔗系統(tǒng)基礎(chǔ)上,AGL1或LBA4404工程菌OD_(600)0.3-04遺傳轉(zhuǎn)化分生組織,21℃培養(yǎng)3天,Timentin抑制農(nóng)桿菌,恢復(fù)培養(yǎng)14天,篩選2-3個月,分化植株1-2個月,植株移栽。比較了分生組織經(jīng)愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基CI_3培養(yǎng)0.5天、7天、28天、56天才農(nóng)桿菌浸染的轉(zhuǎn)化效率。共進(jìn)行了3次試驗,以外植體表面積相當(dāng)于基因槍轉(zhuǎn)化時每次槍擊的面積為單位,每次試驗每份材料10槍,共計120槍,總體轉(zhuǎn)化效率為每槍1.5個轉(zhuǎn)化事件。Southern blot、蛋白活性分析等在分子水平檢測到外源基因的整合與表達(dá)。更為重要的是,改進(jìn)的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化甘蔗技術(shù)不需要菌體離心與重懸,分生組織等受體材料可以周年獲得,為大規(guī)模轉(zhuǎn)化獲得足夠大的育種群體并培育出基因工程甘蔗新品種提供了技術(shù)支撐。

【作者單位】：
【關(guān)鍵詞】：
【基金】：國家自然科學(xué)基金課題(編號:30671330)資助
【分類號】：S566.1
【正文快照】：

農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化甘蔗系統(tǒng)優(yōu)化@羅瓊$云南農(nóng)業(yè)大學(xué)!昆明 650201 @姚麗$云南農(nóng)業(yè)大學(xué)!昆明 650201$云南省甘蔗遺傳改良重點(diǎn)實驗室!開遠(yuǎn) 661600 @吳才文$云南省甘蔗遺傳改良重點(diǎn)實驗室!開遠(yuǎn) 661600 @朱禎$中國科學(xué)院遺傳發(fā)育所!北京 100101 @曾千春$云南農(nóng)業(yè)大學(xué)!昆明 650

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