本文關鍵詞：農桿菌介導遺傳轉化在水稻基因工程育種中的應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國的遺傳學研究——遺傳學進步推動中國西部經濟與社會發(fā)展——2011年中國遺傳學會大會論文摘要匯編》2011年

農桿菌介導轉化甘蔗系統(tǒng)優(yōu)化

羅瓊  姚麗  吳才文  朱禎  曾千春  

【摘要】：高光效C4作物甘蔗是重要的糖料和能源植物,其復雜的遺傳背景導致傳統(tǒng)方法改良甘蔗品種十分困難。農桿菌介導轉化甘蔗可以較快地改良甘蔗的單一性狀,但轉化效率低獲得可穩(wěn)定遺傳轉化體相對較少。我們對該技術的一些改進提高了總體轉化效率。首先將玉米核基質結合序列MAR添加在目標基因表達盒兩側,形成MAR-gene-MAR結構,以克服轉基因的位置效應。nptⅡ為篩選標記,G418或巴龍霉素等抗生素篩選;混合菌液法準備浸染液;添加半胱氨酸等抗氧化劑對未成熟心葉或分生組織切段預處理后再農桿菌浸染;培養(yǎng)基中添加5.0μMCuSO_4,弱光照處理等提高甘蔗胚性愈傷組織和再生植株效率。在優(yōu)化農桿菌轉化甘蔗系統(tǒng)基礎上,AGL1或LBA4404工程菌OD_(600)0.3-04遺傳轉化分生組織,21℃培養(yǎng)3天,Timentin抑制農桿菌,恢復培養(yǎng)14天,篩選2-3個月,分化植株1-2個月,植株移栽。比較了分生組織經愈傷組織誘導培養(yǎng)基CI_3培養(yǎng)0.5天、7天、28天、56天才農桿菌浸染的轉化效率。共進行了3次試驗,以外植體表面積相當于基因槍轉化時每次槍擊的面積為單位,每次試驗每份材料10槍,共計120槍,總體轉化效率為每槍1.5個轉化事件。Southern blot、蛋白活性分析等在分子水平檢測到外源基因的整合與表達。更為重要的是,改進的農桿菌轉化甘蔗技術不需要菌體離心與重懸,分生組織等受體材料可以周年獲得,為大規(guī)模轉化獲得足夠大的育種群體并培育出基因工程甘蔗新品種提供了技術支撐。

【作者單位】：
【關鍵詞】：
【基金】：國家自然科學基金課題(編號:30671330)資助
【分類號】：S566.1
【正文快照】：

農桿菌介導轉化甘蔗系統(tǒng)優(yōu)化@羅瓊$云南農業(yè)大學!昆明 650201 @姚麗$云南農業(yè)大學!昆明 650201$云南省甘蔗遺傳改良重點實驗室!開遠 661600 @吳才文$云南省甘蔗遺傳改良重點實驗室!開遠 661600 @朱禎$中國科學院遺傳發(fā)育所!北京 100101 @曾千春$云南農業(yè)大學!昆明 650

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