本文關(guān)鍵詞：無痕基因敲除技術(shù)構(gòu)建鼠傷寒沙門菌luxS基因突變株

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【摘要】：為驗證一種基于定點突變的無痕基因敲除技術(shù)(Scarless deletion)在鼠傷寒沙門菌中的有效性,本研究以鼠傷寒沙門菌中的lux S基因為靶基因,利用-Red重組酶和重疊延伸PCR(SOE-PCR)引入定點突變,以AAA代替lux S基因的起始密碼ATG,改變lux S基因編碼序列,通過測序驗證并采用2型自誘導(dǎo)物(AI-2)試驗檢測是否有信號分子產(chǎn)生�；驕y序結(jié)果顯示lux S基因的起始密碼ATG被引入的AAA代替;AI-2試驗未檢測到突變基因菌株的AI-2產(chǎn)物,而對照的野生菌株有AI-2產(chǎn)生,表明突變基因失活,方法有效。利用無痕基因敲除技術(shù)構(gòu)建突變株簡單快速,并且不影響被突變基因的另一條DNA單鏈序列,具有廣泛的應(yīng)用前景。
【作者單位】： 新疆兵團塔里木盆地生物資源保護利用重點實驗室;新疆塔里木大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計劃(NCET-11-1071) 新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團“兵團英才”項目
【分類號】：S852.61
【正文快照】： 鼠傷寒沙門菌(Salmonella typhimurium)是一種重要的病原菌,具有廣泛的致病性,能夠引起多種動物副傷寒,主要癥狀為胃腸炎或敗血癥,并可以引起人類的食物中毒。因此,研究鼠傷寒沙門菌的毒力基因功能可以有效制定防制策略。常規(guī)的基因敲除技術(shù)是利用同源重組以某種篩選標(biāo)記(如抗

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