本文關(guān)鍵詞：丹參miR408基因前體序列的克隆及表達(dá)分析

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【摘要】：MiR408是植物中一類高度保守的miRNA,其靶基因編碼含銅蛋白,miR408的表達(dá)受植物生長發(fā)育和環(huán)境條件的顯著影響。擬南芥中miR408在HY5-SPL7基因網(wǎng)絡(luò)中起著關(guān)鍵作用,而HY5-SPL7基因網(wǎng)絡(luò)可介導(dǎo)擬南芥對光照和銅離子的協(xié)調(diào)應(yīng)答,進(jìn)一步表明miR408在植物對環(huán)境的響應(yīng)中發(fā)揮了核心作用。本研究基于丹參基因組Survey數(shù)據(jù)庫,從中搜索并克隆得到366 bp的含有穩(wěn)定莖環(huán)結(jié)構(gòu)的miR408前體序列及其上游723 bp片段的啟動子區(qū),Gen Bank登錄號分別為KU360384和KU360385,并將miR408的前體序列命名為SmMIR408。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示:Sm-MIR408上游啟動子序列與模式植物擬南芥Ath-MIR408、水稻OsaMIR408啟動子區(qū)具有許多相同的順式作用元件,如G-box、CGTCA-motif、TGACG-motif、GTAC-motif等,而HSE、CATT-motif作用元件僅存在于丹參啟動子區(qū);miR408成熟序列在不同物種中具有很高的保守性;基于不同物種miR408前體序列構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示,來源于單子葉植物的miR408前體序列聚為一支,來源于雙子葉植物的miR408前體序列聚為另一支。實時定量PCR分析結(jié)果顯示:Sm-MIR408在丹參的根、莖、葉、花中都有表達(dá),其在花中的表達(dá)量最高,根中最低;Sm-MIR408的表達(dá)受茉莉酸甲酯和傷害的抑制,黑暗和持續(xù)光照也可抑制該基因的表達(dá)。Sm-MIR408基因的克隆與表達(dá)分析為今后研究丹參miR408的功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 藥用資源與天然藥物化學(xué)教育部重點實驗室西北瀕危藥材資源開發(fā)國家工程實驗室陜西師范大學(xué);
【基金】：陜西省自然科學(xué)基金項目(2014JQ3107) 中央高校基本科研業(yè)務(wù)費專項資金項目(GK201302043) 陜西師范大學(xué)勤助科研創(chuàng)新基金項目(KY2015ZD05)~~
【分類號】：S567.53
【正文快照】： This work was funded by grants from the Natural Science Foundation of Shaanxi Province(2014JQ3107),Fundament ResearchFunds for the Central Universities(GK201302043),and Shaanxi Normal University Work-Study Program For Scientific Research In-novation Fund，

本文編號：1176994