本文關鍵詞：剛地弓形蟲ROP16基因的克隆及生物信息學分析

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【摘要】：目的構(gòu)建剛地弓形蟲棒狀體蛋白16(TgROP16)真核重組表達載體,對TgROP16基因編碼蛋白進行生物信息學分析。方法提取剛地弓形蟲總RNA,根據(jù)TgROP16基因的開放閱讀框架設計引物,采用逆轉(zhuǎn)錄PCR(RTPCR)擴增ROP16基因,經(jīng)EcoR I、Not I酶切后連接入真核表達載體pVAX1中,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸埃希菌(E.coli)XL1-Blue。提取陽性菌落質(zhì)粒,進行PCR、雙酶切鑒定及基因測序,對所獲序列進行生物信息學分析。結(jié)果 TgROP基因RT-PCR擴增產(chǎn)物與預期一致,大小約為2 100bp。重組質(zhì)粒經(jīng)PCR及雙酶切鑒定構(gòu)建正確。測序顯示獲得的TgROP16基因片段為2 124bp,與GenBank已收錄的弓形蟲ROP16基因序列(登錄號為GQ249093.1)比對,一致性為99.8%。預測其編碼蛋白TgROP16為非跨膜分泌蛋白,含707個氨基酸,分子式為C3343H5339N967O1024S2,分子質(zhì)量單位為76.1352ku,理論等電點為9.18;在TgROP16蛋白的二級結(jié)構(gòu)中α-螺旋、延伸鏈、β-轉(zhuǎn)角和無規(guī)則卷曲分別占比35.79%、14.29%、7.07%和42.86%;含多個可形成卷曲螺旋構(gòu)象的區(qū)域與可成為磷酸化位點的氨基酸殘基,存在信號肽序列,含39個B細胞抗原表位、24個CTL細胞抗原表位及33個Th細胞抗原表位。結(jié)論成功構(gòu)建了pVAX1-ROP16真核表達重組質(zhì)粒,生物信息學分析表明其編碼蛋白TgROP16具有良好的抗原性及免疫原性,有望作為弓形蟲疫苗候選分子。
【作者單位】： 河北北方學院病原生物學與免疫學研究所;
【基金】：河北北方學院校級重大課題(No.ZD201312)
【分類號】：R382.5
【正文快照】： ***動物中的大多數(shù)種屬,有超過30種鳥類和300種哺乳動物被感染,以人類的感染多見[1]。孕婦早期感染懷剛地弓形蟲孕可導致流產(chǎn)或死胎,存活胎兒也可出現(xiàn)脈絡膜視網(wǎng)膜炎、腦積水、頭小畸形、顱內(nèi)鈣化等異常。T細胞缺陷如器官移植受者、AIDS患者、惡性血液病患者、免疫治療法接受

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