本文關(guān)鍵詞：高表達(dá)Sptlc2基因促油酸誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞凋亡及自噬

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【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)擬從絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶長(zhǎng)鏈亞基2(serine palmitoy ltransferase long chain base subunit 2,Sptlc2)基因這一切入點(diǎn),明確神經(jīng)酰胺從頭合成途徑關(guān)鍵酶Sptlc2對(duì)HSC-T6細(xì)胞凋亡及自噬的影響,證實(shí)干預(yù)HSC-T6細(xì)胞凋亡及自噬的新靶點(diǎn)。方法:1.體外培養(yǎng)SD大鼠HSC-T6細(xì)胞株,進(jìn)行分組:HSC-T6細(xì)胞組(正常對(duì)照組)、油酸誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞組(油酸組)、油酸誘導(dǎo)的pcDNA3.1(+)-NC組(空載體組)、油酸誘導(dǎo)的pcDNA3.1(+)-Sptlc2組(Sptlc2轉(zhuǎn)染組),除正常對(duì)照組外,其余各組均采用100umol/l油酸共培養(yǎng)HSC-T6細(xì)胞。2.轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,應(yīng)用q PCR技術(shù)檢測(cè)各組HSC-T6細(xì)胞內(nèi)Sptlc2 mRNA表達(dá)情況。3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組HSC-T6細(xì)胞凋亡情況。4.MDC染色法熒光顯微鏡下觀察各組HSC-T6細(xì)胞內(nèi)自噬體數(shù)量。5.Western blot技術(shù)檢測(cè)各組HSC-T6細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2,自噬標(biāo)志蛋白LC3B,自噬相關(guān)蛋白Atg5、Beclin-1的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1.各組HSC-T6細(xì)胞內(nèi)Sptlc2 mRNA表達(dá)情況:油酸組與正常對(duì)照組比較,Sptlc2 mRNA表達(dá)明顯增加,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0.01)。Sptlc2轉(zhuǎn)染組與油酸組、空載體組比較,Sptlc2 mRNA表達(dá)明顯增加,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2.各組hsc-t6細(xì)胞凋亡情況:油酸組與正常對(duì)照組比較,總凋亡率明顯升高,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。sptlc2轉(zhuǎn)染組與油酸組、空載體組比較,總凋亡率明顯升高,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。3.各組hsc-t6細(xì)胞內(nèi)自噬體數(shù)量:經(jīng)mdc染色后,應(yīng)用熒光顯微鏡觀察顯示:油酸組與正常對(duì)照組比較,自噬體數(shù)量明顯增多。sptlc2轉(zhuǎn)染組與油酸組、空載體組比較,自噬體數(shù)量明顯增多。4.各組hsc-t6細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白bax、bcl-2的蛋白表達(dá)情況:油酸組與正常對(duì)照組比較,凋亡相關(guān)蛋白bax表達(dá)明顯增加,凋亡相關(guān)蛋白bcl-2表達(dá)明顯減少,bax/bcl-2比值明顯變大,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);sptlc2轉(zhuǎn)染組與油酸組、空載體組比較,凋亡相關(guān)蛋白bax表達(dá)明顯增加,凋亡相關(guān)蛋白bcl-2表達(dá)明顯減少,bax/bcl-2比值明顯變大,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);5.各組hsc-t6細(xì)胞內(nèi)自噬標(biāo)志蛋白lc3b,自噬相關(guān)蛋白atg5、beclin-1的蛋白表達(dá)情況:油酸組與正常對(duì)照組比較,自噬標(biāo)志蛋白lc3b-ii表達(dá)明顯增加,自噬標(biāo)志蛋白lc3b-i表達(dá)明顯減少,lc3b-ii/lc3b-i比值明顯變大,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);自噬相關(guān)蛋白beclin-1表達(dá)明顯增加,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);自噬相關(guān)蛋白atg5表達(dá)增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。sptlc2轉(zhuǎn)染組與油酸組、空載體組比較,自噬標(biāo)志蛋白lc3b-ii表達(dá)明顯增加,自噬標(biāo)志蛋白lc3b-i表達(dá)明顯減少,lc3b-ii/lc3b-i比值明顯變大,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意(p0.01);自噬相關(guān)蛋白Beclin-1表達(dá)明顯增加,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);自噬相關(guān)蛋白Atg5表達(dá)增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.油酸可以誘導(dǎo)HSC-T6細(xì)胞凋亡及自噬。2.上調(diào)神經(jīng)酰胺從頭合成途徑關(guān)鍵酶Sptlc2可以促進(jìn)油酸誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞凋亡及自噬。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 周彬;黃巧冰;;血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年19期

2 石豐榕;汪森明;;神經(jīng)酰胺代謝在細(xì)胞凋亡與自噬中的作用[J];廣東醫(yī)學(xué);2012年20期

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本文編號(hào)：1141674