本文關鍵詞：KIAA1199基因重組慢病毒載體的構建及在人胃腫瘤細胞MKN28中的表達

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【摘要】：目的構建KIAA1199基因過表達的重組慢病毒載體,感染人胃癌細胞MKN28并使KIAA1199基因有效表達。方法將慢病毒載體GV367和KIAA1199基因序列用Age I和Nhe I雙酶切、連接、篩選及測序獲得重組慢病毒質粒GV367-KIAA1199。將測序正確的GV367-KIAA1199重組載體和輔助質粒Help1.0和Help2.0用Lipofectamine2000共轉染293T細胞,得到重組慢病毒載體LV-KIAA1199。予熒光稀釋法和藥物篩選法測定重組慢病毒的感染滴度。以攜帶空白基因片段的慢病毒載體LV-NC為病毒對照組。將LV-KIAA1199和LV-NC以相同的病毒感染復數(shù)(MOI)分別感染人胃癌細胞株MKN28;熒光顯微鏡觀察EGFP在細胞中的表達;實時定量PCR檢測KIAA1199的m RNA在細胞中的表達水平。結果重組慢病毒載體LV-KIAA1199構建成功,LV-KIAA1199感染胃癌細胞后,熒光顯微鏡下可見細胞中呈現(xiàn)綠色熒光;KIAA1199的m RNA的表達均顯著高于對照病毒組。結論重組慢病毒載體LV-KIAA1199可攜帶KIAA1199基因在人胃癌細胞株MKN28中進行有效過表達。
【作者單位】： 上海交通大學醫(yī)學院附屬第九人民醫(yī)院(北部)消化科;
【關鍵詞】： KIAA 慢病毒載體 胃腫瘤 構建 表達
【基金】：上海交通大學醫(yī)學院基金項目(14XJ10066) 上海市寶山區(qū)科委科研基金項目(13-E-2)
【分類號】：R735.2
【正文快照】： 胃癌是世界范圍內常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,嚴重威脅著人類的身體健康。尤其在中國,胃癌的發(fā)病率和死亡率仍居高不下,均僅次于肺癌位居第二[1],胃癌死亡率占該病全球死亡率的1/4[2]。進一步深入研究胃癌的發(fā)生發(fā)展機制和尋找新的分子靶標,對于胃癌的早期發(fā)現(xiàn)和診治、改善患者預

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9 張U，

本文編號：1106829