本文關(guān)鍵詞：KIAA1199基因重組慢病毒載體的構(gòu)建及在人胃腫瘤細(xì)胞MKN28中的表達(dá)

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【摘要】：目的構(gòu)建KIAA1199基因過表達(dá)的重組慢病毒載體,感染人胃癌細(xì)胞MKN28并使KIAA1199基因有效表達(dá)。方法將慢病毒載體GV367和KIAA1199基因序列用Age I和Nhe I雙酶切、連接、篩選及測(cè)序獲得重組慢病毒質(zhì)粒GV367-KIAA1199。將測(cè)序正確的GV367-KIAA1199重組載體和輔助質(zhì)粒Help1.0和Help2.0用Lipofectamine2000共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,得到重組慢病毒載體LV-KIAA1199。予熒光稀釋法和藥物篩選法測(cè)定重組慢病毒的感染滴度。以攜帶空白基因片段的慢病毒載體LV-NC為病毒對(duì)照組。將LV-KIAA1199和LV-NC以相同的病毒感染復(fù)數(shù)(MOI)分別感染人胃癌細(xì)胞株MKN28;熒光顯微鏡觀察EGFP在細(xì)胞中的表達(dá);實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)KIAA1199的m RNA在細(xì)胞中的表達(dá)水平。結(jié)果重組慢病毒載體LV-KIAA1199構(gòu)建成功,LV-KIAA1199感染胃癌細(xì)胞后,熒光顯微鏡下可見細(xì)胞中呈現(xiàn)綠色熒光;KIAA1199的m RNA的表達(dá)均顯著高于對(duì)照病毒組。結(jié)論重組慢病毒載體LV-KIAA1199可攜帶KIAA1199基因在人胃癌細(xì)胞株MKN28中進(jìn)行有效過表達(dá)。
【作者單位】： 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院(北部)消化科;
【關(guān)鍵詞】： KIAA 慢病毒載體 胃腫瘤 構(gòu)建 表達(dá)
【基金】：上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院基金項(xiàng)目(14XJ10066) 上海市寶山區(qū)科委科研基金項(xiàng)目(13-E-2)
【分類號(hào)】：R735.2
【正文快照】： 胃癌是世界范圍內(nèi)常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,嚴(yán)重威脅著人類的身體健康。尤其在中國,胃癌的發(fā)病率和死亡率仍居高不下,均僅次于肺癌位居第二[1],胃癌死亡率占該病全球死亡率的1/4[2]。進(jìn)一步深入研究胃癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制和尋找新的分子靶標(biāo),對(duì)于胃癌的早期發(fā)現(xiàn)和診治、改善患者預(yù)

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本文編號(hào)：1106829