本文關鍵詞：巴西橡膠樹HbJAZs基因的克隆與互作蛋白鑒定

  更多相關文章： 橡膠樹 茉莉酸 基因克隆 熒光定量PCR HbJAZs酵母雙雜互作

【摘要】：巴西橡膠樹(Hevea brasiliensis)是天然橡膠的主要來源。膠乳的產生和貯存主要通過乳管來進行,對橡膠樹進行機械損傷或外施茉莉酸都可以誘導乳管分化。茉莉酸是調控橡膠樹乳管分化重要的信號分子,而JAZ蛋白是茉莉酸信號途徑下游基因轉錄調控關鍵的抑制因子,因此對JAZ蛋白的研究對于研究橡膠樹的乳管分化以及產膠機理有重大意義。本研究從以下幾個方面對橡膠樹JAZ蛋白進行了研究：(1) 通過結合GenBank中已有的橡膠cDNA序列和本實驗室轉錄組測序數據,通過電子克隆的方法獲得5個橡膠JAZ基因全長序列,并通過PCR技術成功擴增得到HbJAZ3, HbJAZ5, HbJAZ6和HbJAZ12。其編碼區(qū)大小分別為852bp,786bp, 426bp和699bp。(2)利用實時定量PCR研究了HbJAZ3, HbJAZ5, HbJAZ6, HbJAZ12這四個基因在膠乳、葉片、莖尖、樹皮、雄蕊及雌蕊中的表達組織特異性,以及傷誘導、外施茉莉酸處理對這四個基因表達的影響。發(fā)現HbJAZ3在雌蕊和雄蕊中表達量較高,HbJAZ5在樹皮中表達量最高,HbJAZ6在樹皮和雄蕊中表達量高,HbJAZ12在雌蕊中表達量最高。說明這四種基因可能分別在這些組織中起重要作用。另外發(fā)現傷誘導均可以誘導這四種基因的表達。而茉莉酸處理可以誘導HbJAZ3和HbJAZ12的表達,抑制HbJAZ4和HbJAZ6的表達。(3)構建HbJAZ3,5,6,12的酵母雙雜誘餌以及捕獲載體,再加上已有的其余HbJAZs的酵母誘餌與捕獲載體,進行HbJAZs蛋白之間的互作,發(fā)現HbJAZ2,5,6能夠形成同源二聚體互作,而HbJAZ1,2,3,5,6,8,9,10,11,12能夠與某個或幾個其余HbJAZ蛋白形成異源二聚體進而互作。(4)將已有的所有HbJAZs的捕獲載體與實驗室已有的HbCoil的誘餌載體進行酵母雙雜互作,發(fā)現在添加冠菌素(Coronatine)的情況下,HbCoi1與HbJAZs中的HbJAZ8, HbJAZ9互作,而不與其余的HbJAZs互作,說明在橡膠樹中,HbCoi1可能通過與HbJAZs蛋白互作調控下游信號。
【關鍵詞】：橡膠樹 茉莉酸 基因克隆 熒光定量PCR HbJAZs酵母雙雜互作
【學位授予單位】：海南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S794.1
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 1 引言8-17
• 1.1 研究背景8
• 1.2 巴西橡膠樹簡介以及橡膠樹乳管分化機制和膠乳產生途徑8-10
• 1.2.1 巴西橡膠樹簡介8
• 1.2.2 橡膠樹乳管分化的研究8-9
• 1.2.3 巴西橡膠樹膠乳的生物合成9-10
• 1.3 植物茉莉酸信號途徑概述10-15
• 1.3.1 茉莉酸及其衍生物簡介10
• 1.3.2 茉莉酸的生物合成10-11
• 1.3.3 茉莉酸的信號傳導途徑11-12
• 1.3.4 JAZ基因家族12-13
• 1.3.5 茉莉酸信號的受體13-14
• 1.3.6 茉莉酸在橡膠生物合成中的作用14-15
• 1.4 酵母雙雜技術15-16
• 1.4.1 酵母雙雜技術15
• 1.4.2 酵母雙雜技術原理15-16
• 1.4.3 酵母雙雜系統(tǒng)的構建16
• 1.5 本研究的目的和意義16
• 1.6 本研究技術路線16-17
• 2 材料與方法17-31
• 2.1 材料與試劑17
• 2.1.1 實驗材料17
• 2.1.2 試劑及工具17
• 2.2 實驗方法17-31
• 2.2.1 巴西橡膠HbJAZs基因的cDNA全長克隆17-21
• 2.2.2 巴西橡膠HbJAZs基因熒光定量表達21-24
• 2.2.3 HbJAZs酵母雙雜載體構建以及與HbCoil1蛋白和橡膠JAZ家族酵母雙雜互作24-31
• 3 結果與分析31-46
• 3.1 HbJAZ3,5,6,12的cDNA克隆以及分析31-35
• 3.1.1 HbJAZ3,5,6,12的cDNA克隆31
• 3.1.2 橡膠基因HbJAZ3,5,6,12的生物信息學分析31-34
• 3.1.3 HbJAZ3,5,6,12同源性以及蛋白序列分析34-35
• 3.2 HbJAZs熒光定量PCR分析35-39
• 3.2.1 橡膠樹葉片RNA提取35-36
• 3.2.2 熒光定量PCR36-39
• 3.3 HbJAZs之間的蛋白互作驗證39-43
• 3.3.1 構建HbJAZ3,5,6,12的誘餌以及捕獲載體39
• 3.3.2 酵母感受態(tài)的高效轉化39-40
• 3.3.3 酵母雙雜轉化40-43
• 3.4 HbJAZs與HbCoi1的蛋白互作驗證43-46
• 3.4.1 HbJAZs的誘餌載體以及HbCoi1的捕獲載體的構建43
• 3.4.2 酵母感受態(tài)的轉化43-44
• 3.4.3 酵母雙雜轉化44-46
• 4 討論46-49
• 4.1 HbJAZ3,5,6,12基因的克隆以及生物信息學分析46-47
• 4.2 HbJAZ3,5,6,12在橡膠樹中的表達分析47
• 4.3 HbJAZ蛋白之間的互作47-48
• 4.4 HbCoi1與HbJAZ蛋白之間的互作48-49
• 參考文獻49-52
• 附錄52-55
• 致謝55

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