本文關(guān)鍵詞：人PD-L1基因啟動(dòng)子克隆及其熒光素酶報(bào)告基因載體的構(gòu)建

  更多相關(guān)文章： PD-L 啟動(dòng)子克隆 雙熒光素酶報(bào)告基因

【摘要】：目的:對(duì)人源PD-L1基因啟動(dòng)子進(jìn)行PCR擴(kuò)增,構(gòu)建PD-L1熒光素酶報(bào)告基因。方法:用PCR擴(kuò)增方法獲得PD-L1基因啟動(dòng)子;PD-L1啟動(dòng)子和載體行KpnⅠ、XhoⅠ酶切、連接和轉(zhuǎn)化,然后行菌落PCR以及測(cè)序等。構(gòu)建成功后轉(zhuǎn)染至A549細(xì)胞中并檢測(cè)PD-L1啟動(dòng)子活性。結(jié)果:經(jīng)PCR方法擴(kuò)增出PD-L1基因啟動(dòng)子片段,;菌落PCR鑒定各重組體構(gòu)建正確并經(jīng)生工測(cè)序成功;瞬時(shí)轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后經(jīng)報(bào)告基因檢測(cè)得知所克隆的不同片段序列具有啟動(dòng)子活性。結(jié)論:成功克隆PD-L1基因啟動(dòng)子,構(gòu)建出不同片段基因啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因,為進(jìn)一步研究其分子機(jī)制提供詳實(shí)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 皖南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院弋磯山醫(yī)院腫瘤內(nèi)科;皖南醫(yī)學(xué)院麻醉學(xué)院;皖南醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)院;皖南醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)影像與檢驗(yàn)學(xué)院;皖南醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： PD-L 啟動(dòng)子克隆 雙熒光素酶報(bào)告基因
【分類號(hào)】：Q78;R73-3
【正文快照】： 程序性細(xì)胞死亡蛋白1(programmed death-1,PD-1)為PDCD1基因編碼的Ⅰ型跨膜糖蛋白[1],PD-1表達(dá)于活化的免疫細(xì)胞表面,如CD4+T細(xì)胞、B細(xì)胞等[2]。PD-L1(programmed death-1-ligand 1,程序性死亡配體-1)是程序性細(xì)胞死亡蛋白1的配體之一,同屬CD28/B7家族。PD-L1多表達(dá)于腫瘤細(xì)胞

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