本文關(guān)鍵詞：加減右歸飲對(duì)實(shí)驗(yàn)兔膝骨性關(guān)節(jié)炎軟骨損傷及Fas、FasL、P53等凋亡基因表達(dá)的影響

  更多相關(guān)文章： 加減右歸飲 骨性關(guān)節(jié)炎 軟骨細(xì)胞 Fas FasL P53

【摘要】：目的:建立一種與人類膝骨關(guān)節(jié)炎相似的兔膝骨性關(guān)節(jié)炎模型,并在確定造模成功的基礎(chǔ)上,對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎模型進(jìn)行藥物干預(yù),觀察中藥加減右歸飲對(duì)實(shí)驗(yàn)兔膝骨性關(guān)節(jié)炎模型軟骨損傷及Fas、Fas L、P53等凋亡基因表達(dá)的影響,進(jìn)而為加減右歸飲的臨床應(yīng)用提供理論支持。方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組:選用普通日本大耳兔48只隨機(jī)分成4組,每組12只:正常組、模型組、塞來昔布組、加減右歸飲組。造模方法:分別將模型組、塞來昔布組和加減右歸飲組實(shí)驗(yàn)兔左后膝于伸直位用醫(yī)用高分子石膏固定4周,建立實(shí)驗(yàn)兔膝骨性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型。確定造模成功后第一天即行藥物干預(yù),各組實(shí)驗(yàn)兔按250g/只/日的飼料量飼養(yǎng),以確保塞來昔布組和加減右歸飲組實(shí)驗(yàn)兔每日的給藥量。對(duì)各組實(shí)驗(yàn)兔分別行藥物干預(yù)6周,其中正常組和模型組不給藥,喂標(biāo)準(zhǔn)飼料;塞來昔布組所喂含飼料中按75mg:250g的藥食比添加西藥塞來昔布;加減右歸飲組組所喂飼料按120g:250g的藥食比混加減右歸飲超細(xì)粉末。持續(xù)給藥六周后以耳緣靜脈空氣栓塞法將各組實(shí)驗(yàn)兔全部處死,并以外科手術(shù)方式快速取下各組實(shí)驗(yàn)兔左后膝關(guān)節(jié)面軟骨(為降低標(biāo)本的差異性,所有軟骨標(biāo)本統(tǒng)一取自實(shí)驗(yàn)兔左膝關(guān)節(jié)股骨髁),對(duì)各組標(biāo)本行肉眼大體觀察、光鏡分析和電鏡分析,并以基因表達(dá)譜芯片技術(shù)對(duì)各組標(biāo)本凋亡相關(guān)基因Fas、Fas L和P53的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)分析。結(jié)果:經(jīng)過藥物干預(yù)后,無論在大體觀察、光鏡分析和電鏡分析的結(jié)果,還是基因表達(dá)譜芯片檢測(cè)結(jié)果,都顯示加減右歸飲組和塞來昔布組軟骨標(biāo)本均同模型組具有顯著差異,但在對(duì)加減右歸飲組和塞來昔布組進(jìn)行形態(tài)學(xué)對(duì)比時(shí),二者未表現(xiàn)出明顯差異,基因表達(dá)譜芯片檢測(cè)結(jié)果提示在中藥加減右歸飲和西藥塞來昔布在抑制軟骨細(xì)胞凋亡的路徑上具有差異性。結(jié)論:(1)通過模型組標(biāo)本與正常組的大體觀察評(píng)分、光鏡觀察結(jié)果Mankin’s評(píng)分的對(duì)比,說明關(guān)節(jié)制動(dòng)的造模方法成功的復(fù)制了兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型;(2)大體觀察、光鏡觀察和電鏡觀察相結(jié)合的方法,既可對(duì)各組軟骨標(biāo)本的凋亡進(jìn)行定性,又通過評(píng)分結(jié)果的對(duì)比對(duì)其損傷程度進(jìn)行了定量觀察,彌補(bǔ)了各種觀察方法對(duì)標(biāo)本進(jìn)行單項(xiàng)觀察時(shí)的不足;(3)通過加減右歸飲組同模型組的分別對(duì)比,無論是標(biāo)本的大體觀察評(píng)分對(duì)比,還是光鏡觀察結(jié)果Mankin’s評(píng)分對(duì)比,或是標(biāo)本的電鏡觀察結(jié)果對(duì)比,均提示加減右歸飲對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎的軟骨退變具有良好的治療作用;(4)對(duì)比加減右歸飲組和塞來昔布組的大體觀察評(píng)分、光鏡觀察結(jié)果Mankin’s評(píng)分及電鏡觀察結(jié)果,未發(fā)現(xiàn)顯著差異,提示中藥加減右歸飲在治療骨性關(guān)節(jié)炎時(shí)可以達(dá)到和塞來昔布相同的治療效果;(5)本研究顯示Fas、Fas L和P53等凋亡因子同膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的病變水平密切相關(guān),且在本組數(shù)據(jù)中呈正相關(guān),相關(guān)凋亡因子的表達(dá)或同OA的發(fā)病機(jī)制有關(guān),提示通過應(yīng)用藥物抑制相關(guān)凋亡因子的表達(dá)或?qū)A的防治有重要作用;(6)西藥塞來昔布與中藥加減右歸飲均對(duì)軟骨細(xì)胞相關(guān)促凋亡因子的表達(dá)表現(xiàn)出抑制作用,提示這兩種藥物在OA的治療過程中具有重要作用,可在此基礎(chǔ)上開展進(jìn)一步的臨床或基礎(chǔ)研究,以期深入研究其調(diào)控機(jī)制。(7)在本組數(shù)據(jù)中,中藥加減右歸飲和西藥塞來昔布在抑制軟骨細(xì)胞凋亡的路徑上具有差異性,或可對(duì)其進(jìn)行深入研究以進(jìn)一步揭示中藥加減右歸飲對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎的干預(yù)機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：加減右歸飲 骨性關(guān)節(jié)炎 軟骨細(xì)胞 Fas FasL P53
【學(xué)位授予單位】：云南中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 縮略語一覽表11-12
• 引言12-14
• 第一部分 加減右歸飲對(duì)實(shí)驗(yàn)兔骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞形態(tài)的影響14-26
• 1.實(shí)驗(yàn)材料14-15
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和藥物14
• 1.2 主要設(shè)備及耗材14-15
• 2.實(shí)驗(yàn)方法15-17
• 2.1 實(shí)驗(yàn)兔喂養(yǎng)15
• 2.2 動(dòng)物分組15
• 2.3 給藥方法15-16
• 2.4 動(dòng)物造模16
• 2.5 造模評(píng)價(jià)16-17
• 2.6 取材及標(biāo)本制備17
• 3.觀察項(xiàng)目及檢測(cè)方法17-19
• 3.1 實(shí)驗(yàn)兔的一般觀察17-18
• 3.2 標(biāo)本大體觀察18
• 3.3 形態(tài)學(xué)檢測(cè)18-19
• 4. 統(tǒng)計(jì)分析19
• 5. 結(jié)果19-23
• 5.1 動(dòng)物一般情況觀察結(jié)果19-20
• 5.2 標(biāo)本大體觀察結(jié)果20-21
• 5.3 光鏡下組織學(xué)觀察結(jié)果21-22
• 5.4 透射電鏡下組織學(xué)觀察結(jié)果22-23
• 6. 討論23-25
• 6.1 膝骨關(guān)節(jié)炎模型的建立23-24
• 6.2 加減右歸飲對(duì)兔膝骨性關(guān)節(jié)炎的治療作用24-25
• 7. 結(jié)論25-26
• 第二部分 加減右歸飲對(duì)實(shí)驗(yàn)兔膝骨性關(guān)節(jié)炎相關(guān)凋亡因子的影響26-50
• 1.實(shí)驗(yàn)材料26-27
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和藥物26
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備及耗材26-27
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑及試劑盒27
• 2.實(shí)驗(yàn)方法27-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)兔喂養(yǎng)27
• 2.2 動(dòng)物分組27-28
• 2.3 給藥方法28
• 2.4 動(dòng)物造模28
• 2.5 造模評(píng)價(jià)28-29
• 2.6 取材及標(biāo)本制備29
• 3. 制作基因表達(dá)譜芯片29-38
• 3.1 總RNA提取和質(zhì)量檢測(cè)29-31
• 3.2 RNA反轉(zhuǎn)錄和體外轉(zhuǎn)錄31-35
• 3.3 樣品標(biāo)記和雜交35-38
• 4.結(jié)果38-46
• 4.1 基因芯片質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)38-39
• 4.2 芯片原始信號(hào)值與背景信號(hào)值39-40
• 4.3 陽性控制與陰性控制對(duì)照40
• 4.4 基因表達(dá)譜芯片檢測(cè)結(jié)果40-46
• 5. 討論46-48
• 5.1 膝骨性關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡46-47
• 5.2 軟骨細(xì)胞凋亡的相關(guān)調(diào)控基因47-48
• 6.結(jié)論48-50
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 綜述54-61
• 參考文獻(xiàn)58-61
• 附錄61-66
• 1.動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境及造模照片61
• 2.動(dòng)物造模后取材61-62
• 3.關(guān)節(jié)軟骨標(biāo)本的大體觀察62
• 4. HE染色后軟骨細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察62-63
• 5.電鏡檢測(cè)結(jié)果63-66
• 致謝66-67

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本文編號(hào)：1070565