酵母雙雜交系統(tǒng)是目前鑒定體內(nèi)蛋白相互作用最有效、應(yīng)用最廣泛的一項(xiàng)技術(shù)。為了將其運(yùn)用于本科實(shí)驗(yàn)教學(xué),設(shè)計(jì)了"利用酵母雙雜交系統(tǒng)驗(yàn)證HIF-1α與Jab1相互作用"綜合性實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)包括檢測HIF-1α和Jab1在酵母細(xì)胞中的表達(dá)、毒性及自激活檢測、HIF-1α與Jab1相互作用驗(yàn)證三部分。實(shí)驗(yàn)操作性強(qiáng)、結(jié)果直觀,有利于學(xué)生深入、系統(tǒng)地理解并掌握酵母雙雜交系統(tǒng)技術(shù),有利于提高學(xué)生的科研思維及科研素養(yǎng),有利于促進(jìn)教學(xué)與科研的相互融合。 

【文章來源】：實(shí)驗(yàn)技術(shù)與管理. 2020,37(07)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

HIF-1α和Jab1在酵母中的蛋白表達(dá)檢測

HIF-1α和Jab1自激活檢測

將含pGBKT7、pGBKT7-HIF-1α酵母涂于SD/–Trp培養(yǎng)基上，將轉(zhuǎn)入pGADT7、pGADT7-Jab1酵母涂于SD/–Leu培養(yǎng)基上，30℃倒置培養(yǎng)，觀察比較酵母菌落的大小。如圖3所示，含pGBKT7、pGBKT7-HIF-1α酵母菌大小基本一致；含pGADT7、pGADT7-Jab1酵母菌大小也基本一致。將含有pGBKT7、pGADT7、pGBKT7-HIF-1α和pGADT7-Jab1的酵母菌接種到合適的SD篩選培養(yǎng)基中，30℃、250 rpm培養(yǎng)，利用分光光度計(jì)檢測酵母濃度。如圖4所示，轉(zhuǎn)染空載體和質(zhì)粒的酵母菌（含pGBKT7、pGBKT7-HIF-1α、pGADT7、pGADT7-Jab1）生長曲線基本一致。該結(jié)果表明，HIF-1α和Jab1對酵母無毒性。圖4 含HIF-1α和Jab1酵母細(xì)胞的生長曲線

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3431163