本文關(guān)鍵詞：三氧化二砷和硼替佐米提高多發(fā)性骨髓瘤RPMI-8226細(xì)胞對(duì)NK和γδT細(xì)胞殺傷敏感性的機(jī)制研究

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【摘要】：目的：多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是臨床常見血液系統(tǒng)惡性腫瘤，占惡性腫瘤死亡的2%。雖然大劑量化療和造血干細(xì)胞移植明顯降低了MM的死亡率，但對(duì)于復(fù)發(fā)難治性MM患者的治療仍較困難。因此，亟待尋找能夠提高M(jìn)M治療效果的新方法。近年來，腫瘤免疫治療因其治療效果顯著，越來越受到人們的關(guān)注。腫瘤過繼免疫細(xì)胞治療（adoptive cellular immunotherapy，ACI）技術(shù)是近年來發(fā)展尤為迅速的腫瘤免疫治療手段，已經(jīng)在許多腫瘤的治療中呈現(xiàn)出明顯的治療效果。ACI與MM的常規(guī)治療手段相結(jié)合，能夠提高M(jìn)M的治愈效果，是值得研究的課題。本實(shí)驗(yàn)選用三氧化二砷（arsenic trioxide，ATO）和硼替佐米（bortezomib，Bor）兩種MM臨床常用化療藥物，探討低劑量藥物作用于MM細(xì)胞系RPMI-8226細(xì)胞后能否增強(qiáng)細(xì)胞免疫原性，同時(shí)觀察藥物處理后的MM細(xì)胞對(duì)NK細(xì)胞和γ T細(xì)胞殺傷敏感性的變化，并探討其可能的機(jī)制，為MM的臨床治療提供新思路。 方法：取10例MM患者外周血，分離單個(gè)核細(xì)胞并加入相應(yīng)細(xì)胞因子，向NK和γ T細(xì)胞誘導(dǎo)；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)NK細(xì)胞表面標(biāo)志CD3、CD56、NKG2D和DNAM-1，γ T細(xì)胞表面標(biāo)志CD3、Vγ9、NKG2D和DNAM-1表達(dá)情況；MTT法檢測(cè)ATO與Bor對(duì)RPMI-8226、NK和γ T細(xì)胞增殖的抑制作用；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)RPMI-8226細(xì)胞經(jīng)ATO或Bor預(yù)處理前后細(xì)胞表面MICA、MICB和CD155的變化；鈣黃綠素釋放法檢測(cè)NK和γ T細(xì)胞對(duì)ATO或Bor預(yù)處理的RPMI-8226細(xì)胞的殺傷作用。 結(jié)果：1.10例MM患者外周血單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)相應(yīng)細(xì)胞因子刺激擴(kuò)增后，誘導(dǎo)出大量NK（CD3-CD56+）和γ T（CD3+Vγ9+）細(xì)胞，純度分別為（85.76±6.28）%和（92.30±3.47）%。2. ATO與Bor對(duì)RPMI-8226細(xì)胞的增殖具有抑制作用，且呈劑量依賴性。3.低劑量ATO能夠提高RPMI-8226細(xì)胞表面NKG2D配體MICA和MICB的表達(dá)，且呈時(shí)間依賴性；Bor對(duì)RPMI-8226細(xì)胞表面NKG2D配體MICA和MICB的表達(dá)呈現(xiàn)短暫促進(jìn)作用，8h出現(xiàn)峰值。ATO和Bor均能夠提高RPMI-8226細(xì)胞表面DNAM-1配體CD155的表達(dá)。4.低劑量ATO與Bor在體外對(duì)NK和γ T細(xì)胞的增殖均具有抑制作用。且ATO對(duì)γ T細(xì)胞的抑制作用強(qiáng)于對(duì)RPMI-8226細(xì)胞的作用。5. NK和γ T細(xì)胞對(duì)經(jīng)低劑量ATO或Bor預(yù)處理的RPMI-8226細(xì)胞的殺傷作用，要明顯強(qiáng)于未經(jīng)預(yù)處理的RPMI-8226細(xì)胞。6.單獨(dú)封閉NK細(xì)胞表面受體NKG2D，其對(duì)藥物預(yù)處理組和未經(jīng)藥物處理組的的殺傷作用明顯降低，但是藥物預(yù)處理組仍然高于未經(jīng)藥物處理組；單獨(dú)封閉NK細(xì)胞表面受體DNAM-1或共同封閉DNAM-1和NKG2D后，其對(duì)藥物預(yù)處理組和未經(jīng)藥物處理組的殺傷作用明顯降低，兩組之間無差異。7.單獨(dú)或共封閉γ T細(xì)胞表面受體NKG2D和DNAM-1后，其對(duì)藥物預(yù)處理組和未經(jīng)藥物處理組的殺傷作用明顯降低，但是藥物預(yù)處理組仍然高于未經(jīng)藥物未處理組。 結(jié)論：1.本實(shí)驗(yàn)成功培養(yǎng)擴(kuò)增出純度較高的NK和γ T細(xì)胞，其對(duì)RPMI-8226細(xì)胞具有明顯殺傷作用。2. ATO或Bor對(duì)NK、γ T和RPMI-8226細(xì)胞的增殖均具有抑制作用，ATO對(duì)γ T細(xì)胞的增殖抑制作用最強(qiáng)，其次分別是RPMI-8226細(xì)胞和NK細(xì)胞。而Bor對(duì)RPMI-8226細(xì)胞的增殖抑制作用最強(qiáng)。3.低劑量ATO或Bor預(yù)處理RPMI-8226細(xì)胞后，可增強(qiáng)靶細(xì)胞對(duì)NK效應(yīng)細(xì)胞的殺傷敏感性，其機(jī)制與藥物提高靶細(xì)胞表面受體MICA、MICB和CD155有關(guān)，，推測(cè)其依賴于DNAM-1和NKG2D途徑，且主要依賴DNAM-1途徑。4.低劑量ATO或Bor預(yù)處理RPMI-8226細(xì)胞后，可增強(qiáng)靶細(xì)胞對(duì)γ T效應(yīng)細(xì)胞的殺傷敏感性，其機(jī)制與藥物提高靶細(xì)胞表面受體MICA、MICB和CD155有關(guān)，推測(cè)其依賴于DNAM-1和NKG2D途徑，可能還存在其它的途徑。
【關(guān)鍵詞】：多發(fā)性骨髓瘤 三氧化二砷 硼替佐米 NK細(xì)胞 γδT細(xì)胞 殺傷敏感性
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文縮略詞11-12
• 第1章 緒論12-14
• 第2章 綜述14-25
• 2.1 MM 及其治療現(xiàn)狀14-15
• 2.2 ATO 抗腫瘤機(jī)制15-18
• 2.3 Bor 抗腫瘤機(jī)制18-21
• 2.4 ACI 技術(shù)21-24
• 2.5 展望24-25
• 第3章 材料與方法25-33
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料25-27
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法27-32
• 3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析32-33
• 第4章 結(jié)果33-45
• 4.1 NK 細(xì)胞表面免疫表型及活化分子的鑒定33
• 4.2 γδT 細(xì)胞表面免疫表型及活化分子的鑒定33-34
• 4.3 ATO 或 Bor 對(duì) RPMI-8226 細(xì)胞增殖的影響34-35
• 4.4 ATO 或 Bor 對(duì) RPMI-8226 細(xì)胞表面 MICA 和 MICB 表達(dá)的影響35-36
• 4.5 ATO 或 Bor 對(duì) NK 和γδT 細(xì)胞增殖的影響36-37
• 4.6 ATO 或 Bor 對(duì) NK 細(xì)胞殺傷 RPMI-8226 細(xì)胞的影響37-38
• 4.7 ATO 或 Bor 對(duì)γδT 細(xì)胞殺傷 RPMI-8226 細(xì)胞的影響38-39
• 4.8 ATO 或 Bor 對(duì) RPMI-8226 細(xì)胞表面 NKG2D 和 DNAM-1 配體表達(dá)的影響39-41
• 4.9 經(jīng)抗體封閉后 NK 細(xì)胞對(duì) RPMI-8226 細(xì)胞的殺傷作用41-43
• 4.10 經(jīng)抗體封閉后的γδT 細(xì)胞對(duì)殺傷 RPMI-8226 細(xì)胞的殺傷作用43-45
• 第5章 討論45-49
• 第6章 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-56
• 作者簡(jiǎn)介56-57
• 致謝57

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張?jiān)獊?寧琴;韓梅芳;;NK細(xì)胞TRAIL信號(hào)通路在病毒性肝炎發(fā)病中的作用研究進(jìn)展[J];實(shí)用肝臟病雜志;2013年06期

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8 陳然;鄧鑫;彭佩純;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與乙型肝炎關(guān)系的研究進(jìn)展[J];廣西醫(yī)學(xué);2014年10期

9 廖紫s

本文編號(hào)：995003