本文關(guān)鍵詞：探討中國(guó)漢族女性HMMR基因多態(tài)性與乳腺癌易感性的相關(guān)性研究

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【摘要】：研究背景和目的：近年來(lái),乳腺癌有發(fā)病率大幅度上升而平均發(fā)病年齡下降的趨勢(shì)。乳腺癌不僅對(duì)患病的身體健康也對(duì)其心理也造成了極大的傷害,憑借其惡劣的社會(huì)學(xué)影響特征,乳腺癌成為了全世界腫瘤學(xué)關(guān)注的重點(diǎn)之一。雖然,現(xiàn)在乳腺癌的治療除了傳統(tǒng)的手術(shù)治療、放化療,又有靶向治療的出現(xiàn),但是,不管采取什么樣的治療,對(duì)患者及患者家庭造成的極大心理?yè)p傷及經(jīng)濟(jì)損失無(wú)法避免。因此,乳腺癌的早期診斷對(duì)患者尤為關(guān)鍵。乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展是由環(huán)境、遺傳、生活習(xí)慣等等因素作用下的一個(gè)復(fù)雜的病理生化過(guò)程,本實(shí)驗(yàn)即研究HMMR基因多態(tài)性與乳腺癌易感性的關(guān)系,希望從基因角度剖析乳腺癌的易感性規(guī)律。目前,全世界科學(xué)家公認(rèn)雌激素受體、孕激素受體、c-erbB-2、Ki-67等的狀態(tài)與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、治療效果及預(yù)后有著尤為密切的聯(lián)系。乳腺癌在臨床上有不同的臨床表現(xiàn),腫瘤的生長(zhǎng)浸潤(rùn)特征也不盡相同,科學(xué)家們認(rèn)為,導(dǎo)致這種差異主要是源于基因與分子水平的差異。雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)作為乳腺癌最重要的預(yù)后指標(biāo),它展望了經(jīng)輔助、新輔助治療及晚期乳腺癌治療中激素治療的療效�？茖W(xué)家又依據(jù)這些指標(biāo),將乳腺癌分為4種分子亞型：管腔A型、管腔B型、ERBB2過(guò)表達(dá)型和基底細(xì)胞樣亞型。最早的腫瘤分子分型的觀點(diǎn)是由美國(guó)國(guó)立癌癥研究所于1999年提出。此概念的提出對(duì)隨后的乳腺癌指導(dǎo)治療起到舉足輕重的作用。管腔A型即免疫組織化學(xué)檢測(cè)ER/PR陽(yáng)性,ERBB2陰性,Ki67低表達(dá)。此類型為乳腺癌中發(fā)病率最高、預(yù)后最好的亞型。由于激素受體為陽(yáng)性,故對(duì)內(nèi)分泌治療敏感,而不適合于靶向治療。臨床上常見于早期患者,且治療效果較好。HER-2過(guò)表達(dá)型,即免疫組織化學(xué)檢測(cè)ER、PR陰性,ERBB2陽(yáng)性,Ki-67多為高表達(dá)。在原發(fā)性乳腺癌患者中,有20%-30%的患者存在HER-2過(guò)表達(dá)。該型的特點(diǎn)為ERBB2基因擴(kuò)增,17號(hào)染色體上的RAD5、RRM2等基因表達(dá)下調(diào),而GRB7、TRAP100等基因的表達(dá)上調(diào)。因?yàn)镋R、PR均為陰性,所以對(duì)內(nèi)分泌治療幾乎無(wú)效。在術(shù)后輔助化療中,該型對(duì)含蒽環(huán)類的化療方案較為敏感,而且具有一定的量效關(guān)系。HER-2既是靶向藥物的預(yù)測(cè)指標(biāo),又是一項(xiàng)預(yù)后指標(biāo)。管腔B型即免疫組織化學(xué)檢測(cè)ER陽(yáng)性或PR陽(yáng)性,而HER-2也陽(yáng)性,多見于高齡的乳腺癌患者。且對(duì)他莫昔芬的療效相對(duì)管腔A型差,對(duì)芳香化酶抑制劑的效果卻較好。Basal-like型是免疫組化ER, PR、HER-2均為陰性的乳腺癌。RHAMM(透明質(zhì)酸介導(dǎo)的細(xì)胞游走受體),在細(xì)胞表面又稱為CD168。編碼該蛋白的基因目前研究證實(shí)在人類及鼠類中存在。在人類中我們稱之為HMMR基因,而在鼠類中我們稱之為Hmm基因。HMMR基因定位于人第5號(hào)染色體5q33.2-qter,基因組跨度31669bp,含有14個(gè)外顯子,cDNA全長(zhǎng)2672bp,有一個(gè)2175bp的讀碼框架,編碼725個(gè)氨基酸的蛋白,分子量84Ku。鼠RHAMM基因定位于第11號(hào)染色體q臂,距著絲點(diǎn)19cM(CentiMorgan,厘摩),cDNA全長(zhǎng)3539bp。RHAMM既以膜型存在,又以胞內(nèi)型存在。研究顯示,其產(chǎn)物RHAMM蛋白可作為H-ras通路下游的調(diào)節(jié)因子參與細(xì)胞信號(hào)的無(wú)序傳導(dǎo)和惡性轉(zhuǎn)化。RHAMM被證實(shí)是多面性分子：首先RHAMM具有促進(jìn)腫瘤的作用,其產(chǎn)物己被證實(shí)為促癌物,且可能成為腫瘤細(xì)胞移動(dòng)的促進(jìn)因素,其表達(dá)促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展,且與腫瘤的病理分期相關(guān)。其產(chǎn)物與腫瘤分級(jí)、浸潤(rùn)程度呈一定的正相關(guān)關(guān)系；RHAMM也參與抗腫瘤的作用：人工合成的RHAMM蛋白在細(xì)胞體外培養(yǎng)中可以抑制細(xì)胞的增殖和細(xì)胞克隆的形成,。其具體參數(shù)尚不明確,有待更多的實(shí)驗(yàn)研究。全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)提供了對(duì)于適度關(guān)聯(lián)進(jìn)行一個(gè)可理解、無(wú)偏倚的研究的潛在可能。至2005年末,在基因組序列的30億個(gè)堿基對(duì)中,每1250個(gè)堿基間的平均距離提供了一個(gè)常見的單核苷酸多態(tài)性(SNP),定義為較少等位基因頻率的單核苷酸多態(tài)性,較少等位基因頻率(MAF)5%數(shù)據(jù)庫(kù)。分析顯示,超過(guò)90%的將近1000萬(wàn)個(gè)估計(jì)存在的常見單核苷酸多態(tài)性中至少有一個(gè)與其他的單核苷酸多態(tài)性高度相關(guān)：稱為連鎖不平衡現(xiàn)象。理論上說(shuō),應(yīng)該對(duì)有足夠數(shù)目病例和對(duì)照的50萬(wàn)-60萬(wàn)個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)評(píng)估,應(yīng)該對(duì)特殊癌癥易感性和相關(guān)數(shù)量癥狀進(jìn)行全基因組研究。研究方法：1.選取樣本。所有樣本選自南方醫(yī)科大學(xué)生物抗體研究所組織樣本庫(kù),均為2010年10月至2013年11月期間首次確診為浸潤(rùn)性乳腺癌的女性患者。所有患者均為漢族。確保所有患者無(wú)關(guān)聯(lián)性且無(wú)乳腺癌家族史及乳腺疾病史。所有樣本均統(tǒng)一由2名以上有經(jīng)驗(yàn)的病理學(xué)專家經(jīng)HE染色后確診為浸潤(rùn)性乳腺癌。本研究中統(tǒng)計(jì)了所有患者的姓名、年齡、腫瘤分級(jí)分型、免疫組化等詳細(xì)信息。2.選取SNPs位點(diǎn)。參考GWAS (Genome-wide association study),即全基因組關(guān)聯(lián)分析,從HMMR基因上選取16個(gè)可能與乳腺癌相關(guān)的SNP位點(diǎn),即rs213505,rs299290,rs299318,rs427056,rs2069345,rs2069347,rs2303077, rs4869089,rs6556674,rs10035535,rs1006017,rs13183712,rs17535909, rs17601374,rs74805168, rs193028482。3.行引物設(shè)計(jì)后進(jìn)行PCR、SAP、IPLEX及脫脂點(diǎn)樣等步驟行]HMMR基因多態(tài)性的檢測(cè)。所有的操作過(guò)程嚴(yán)格參照MassARRAY(?)-IPLEX檢測(cè)平臺(tái)的操作說(shuō)明由兩名技術(shù)人員(包括作者)共同完成。參照儀器說(shuō)明,由2名以上技術(shù)人員通過(guò)自動(dòng)和人工兩種方式進(jìn)行多態(tài)性圖像的分析,由作者進(jìn)行結(jié)果的統(tǒng)計(jì)。4.首先對(duì)病例組和對(duì)照組基因型分布頻率進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn),其次,采用統(tǒng)計(jì)分析的方法計(jì)算位點(diǎn)與乳腺癌,分析位點(diǎn)的多態(tài)性與乳腺癌發(fā)生趨勢(shì)的關(guān)系。在此基礎(chǔ)上,再分層分析位點(diǎn)多態(tài)性分別與雌激素受體狀態(tài)、孕激素受體狀態(tài)的關(guān)系。最后分析這些位點(diǎn)的多態(tài)性是否因乳腺癌分子分型的差異而有規(guī)律性的關(guān)聯(lián)�；虻倪z傳有顯性、共顯性、隱性、超顯性四種,那么,本實(shí)驗(yàn)中也詳盡分開為4個(gè)模型,進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析。本實(shí)驗(yàn)使用了SNP分析軟件(http://bioinfo.iconcologia.net/SNPStats)的進(jìn)行了更為簡(jiǎn)單快捷的分析。此外,使用SPSS18.0軟件進(jìn)行了x2檢驗(yàn)和非條件Logistic回歸。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1.對(duì)本研究中所有患者的乳腺癌特征信息進(jìn)行統(tǒng)計(jì)：最常見的病理類型為乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌,占所有病例的92.36%。根據(jù)ER、PR狀態(tài)進(jìn)行分類,其中ER陽(yáng)性患者占60.5%,PR陽(yáng)性患者占57.1%。本研究中的管腔A型(ER和/或PR+, Her-2-)乳腺癌患者占了半數(shù)以上。本研究中確保所有的病例均關(guān)聯(lián)無(wú)乳腺疾病史及乳腺癌家族史,但是,本研究中仍然有9.3%的患者有其他惡性腫瘤的家族史。2.對(duì)所有研究的SNP位點(diǎn)進(jìn)行病例組和對(duì)照組的Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn),共有7個(gè)SNP位點(diǎn)通過(guò)了Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)(P0.05),即rs299318, rs4869089,rs6556674,rs13183712,rs17601374,rs74805168,rs193028482。然而,進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)rs193028482在我們研究的群體中是非多態(tài)性的,所以排除在我們的研究之外。3.位點(diǎn)rs13183712在人群中存在GG、GT、TT三種基因型,這三種基因型在乳腺癌組中的分布頻率為57.3%GG,37.6%GT和5.1%TT,而在對(duì)照組中的頻率為47.5%GG,45%GT和7.4%TT，基因型分布在兩者中存在明顯的差異(P=0.012)。進(jìn)一步分析OR值與可信區(qū)間CI發(fā)現(xiàn),共顯性模型codominant (OR=0.69,95%CI=0.52-0.91,p=0.013),超顯性模型overdominant (OR=0.74, 95%CI=0.56-0.96, p=0.026)。所以,rs13183712位點(diǎn)的GT基因型是降低了乳腺癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)的。4.根據(jù)雌激素受體ER(+/-)分組進(jìn)行分層分析,rs13183712位點(diǎn)的顯性模型中,G/T-T/T基因型與雌激素受體ER有顯著性關(guān)聯(lián),見表3-3-1。其中,ER陰性狀態(tài)時(shí)(OR=0.66,95%CI=0.46-0.95,P=0.024)。而ER陽(yáng)性狀態(tài)時(shí)(OR=0.68,95%CI=0.50-0.94,P=0.018)。rs17601374位點(diǎn)的共顯性與顯性模型中,AT基因型與ER陰性乳腺癌呈負(fù)相關(guān),共顯性模型(OR=0.62,95%CI=0.37-1.06,P=0.036)。5.進(jìn)一步研究孕激素受體PR與本研究中位點(diǎn)多態(tài)性的關(guān)聯(lián)發(fā)現(xiàn),rs4869089位點(diǎn)AA基因型傾向于發(fā)生PR陰性乳腺癌,隱性模型(OR=1.99,95%CI=1.08-3.67,P=0.03)。rs13183712位點(diǎn)GT基因型與PR陽(yáng)性乳腺癌呈負(fù)相關(guān),共顯性模型(OR=0.68,95%CI=0.48-0.95,P=0.04);而在顯性模型中,無(wú)論P(yáng)R的狀態(tài),G/T-T/T基因型均降低乳腺癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。在rs17601374位點(diǎn)AT基因型降低PR陰性乳腺癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),共顯性模型(OR=0.62,95%CI=0.37-1.04,P=0.027),6.乳腺癌的分子分型為本研究的重點(diǎn),我們進(jìn)一步分析了各位點(diǎn)的多態(tài)性與乳腺癌分子分型的關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)rs4869089,rs17601374,rs13183712與管腔B型乳腺癌相關(guān)。rs4869089位點(diǎn)AA基因型傾向于管腔B型乳腺癌,隱性模型(OR=2.23,95%CI=1.17-4.25,P=0.019)。rs17601374位點(diǎn)AT基因型降低管腔B型乳腺癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),共顯性模型(OR=0.5,95%CI=0.27-0.92,P=0.015),超顯性模型(OR=0.51,95%CI=0.27-0.94,p=0.021)。rs13183712中的GT基因型降低管腔B型、HER2+型乳腺癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),在共顯性(OR=0.57,95%CI=0.38-0.86,p=0.011)、及超顯性模型(OR=0.62,95%CI=0.41-0.92,p=0.017)。對(duì)于rs74805168的CT基因型,超顯性(OR=0.24,95%CI=0.06-1.02,P=0.017),降低基底亞型乳腺癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。結(jié)論：1) HMMR基因的位點(diǎn)rs13183712多態(tài)性對(duì)乳腺癌的發(fā)生有保護(hù)作用。2) HMMR基因上的4個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)：rs4869089,rs13183712,rs17601374和rs74805168與乳腺癌ER、PR狀態(tài)或分子分型有不同的相關(guān)性,具體見結(jié)果部分。3)單核苷酸多態(tài)性的研究是人類基因組計(jì)劃很重要的一部分,目的發(fā)現(xiàn)更多與乳腺癌有關(guān)聯(lián)的易感基因,以進(jìn)一步探究其發(fā)病機(jī)制和更好地進(jìn)行該疾病的基因診斷治療。
【關(guān)鍵詞】：HMMR 乳腺癌 SNP 易感性
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-18
• 第一章 前言18-30
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法30-45
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料30-32
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法和步驟32-45
• 第三章 結(jié)果45-55
• 討論55-60
• 結(jié)論60-61
• 參考文獻(xiàn)61-68
• 碩士論文發(fā)表情況68-69
• 致謝69-71

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 邱增華;;雌激素受體與乳腺癌的關(guān)系[J];山東醫(yī)藥;2009年41期

2 南昊成;吳立剛;劉奇?zhèn)?;乳腺癌分子標(biāo)志及分子分型研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2013年09期

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本文編號(hào)：995330