本文關(guān)鍵詞：下調(diào)Wnt4基因后對(duì)胸腺瘤細(xì)胞凋亡的影響

  更多相關(guān)文章： Wnt4基因 JNK基因 胸腺瘤 細(xì)胞凋亡 Wright’s-Giemsa’s混合染色 Hoechst-33342/PI熒光雙染色 蛋白免疫印跡技術(shù) 流式細(xì)胞技術(shù)

【摘要】：目的:通過(guò)構(gòu)建shRNA干擾下調(diào)人胸腺瘤細(xì)胞中Wnt4基因的表達(dá),研究Wnt4基因?qū)π叵倭黾?xì)胞凋亡情況的影響。同時(shí)初步探索人胸腺瘤細(xì)胞中Wnt4基因發(fā)揮作用可能依賴的信號(hào)傳導(dǎo)通路。方法:1.根據(jù)shRNA設(shè)計(jì)的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),構(gòu)建針對(duì)Wnt4基因的4個(gè)干擾位點(diǎn),合成相應(yīng)的序列片段,構(gòu)建shRNA-Wnt4干擾質(zhì)粒。經(jīng)鑒定片段成功插入后,用LipofectamineTM2000作為媒介分別轉(zhuǎn)染重組的四種干擾質(zhì)粒和空白質(zhì)粒到體外培養(yǎng)的人胸腺瘤細(xì)胞。采用RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后Wnt4 mRNA表達(dá),并在四個(gè)重組質(zhì)粒中挑選出對(duì)Wnt4基因抑制效果最好的干擾質(zhì)粒進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.將體外培養(yǎng)的人胸腺瘤細(xì)胞分成4組:空白對(duì)照組;lipo2000組;轉(zhuǎn)染TR001質(zhì)粒組;轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒組。用LipofectamineTM2000進(jìn)行轉(zhuǎn)染48H,采用Wright’s-Giemsa’s混合染色、Hoechst-33342/PI熒光雙染色、流式細(xì)胞學(xué)分析、Western blot等方法檢測(cè)人胸腺瘤細(xì)胞的凋亡。3.將體外培養(yǎng)的人胸腺瘤細(xì)胞分成3組:目的質(zhì)粒組、空質(zhì)粒(TR001)組、空白對(duì)照組;各組細(xì)胞按照分組處理后以LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染不同質(zhì)粒,采用RT-PCR及Western blot檢測(cè)細(xì)胞Wnt4、JNK、β-catenin的mRNA及蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.與相應(yīng)對(duì)照組比較,四種shRNA-Wnt4干擾質(zhì)粒中shRNA-Wnt4-3抑制率為52.37%(P0.05)。作為抑制效果最佳的重組質(zhì)粒進(jìn)入下一步實(shí)驗(yàn)。2.與相應(yīng)對(duì)照組比較,經(jīng)過(guò)shRNA-Wnt4-3質(zhì)粒干擾后的人胸腺瘤細(xì)胞的細(xì)胞凋亡率明顯升高(14.70±0.62、p0.001),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.Wnt4基因下調(diào)后人胸腺瘤細(xì)胞內(nèi)JNK基因表達(dá)也顯著下調(diào)(P0.01),且兩者變化趨勢(shì)一致。結(jié)論:1、shRNA-Wnt4-3質(zhì)粒能夠有效地抑制人胸腺瘤細(xì)胞中Wnt4基因的表達(dá)。2、通過(guò)干擾人胸腺瘤細(xì)胞中的Wnt4基因能夠促進(jìn)人胸腺瘤細(xì)胞的凋亡。提示W(wǎng)nt4基因的異常表達(dá)可是部分人胸腺瘤發(fā)生和發(fā)展的機(jī)制之一。3、采用shRNA干擾Wnt4基因后體外培養(yǎng)的人胸腺瘤細(xì)胞內(nèi)JNK基因表達(dá)顯著下調(diào),說(shuō)明Wnt4基因與JNK基因的表達(dá)有一定的相關(guān)性,Wnt4基因可能依賴于非經(jīng)典的Wnt/JNK信號(hào)通路發(fā)揮作用。
【關(guān)鍵詞】：Wnt4基因 JNK基因 胸腺瘤 細(xì)胞凋亡 Wright’s-Giemsa’s混合染色 Hoechst-33342/PI熒光雙染色 蛋白免疫印跡技術(shù) 流式細(xì)胞技術(shù)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R736.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明11-12
• 前言12-14
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、Wnt4-shRNA干擾質(zhì)粒的構(gòu)建及篩選14-29
• 1.1 研究對(duì)象和方法14-24
• 1.1.1 細(xì)胞系來(lái)源與干擾質(zhì)粒構(gòu)建14-16
• 1.1.2 干擾質(zhì)粒的篩選16-24
• 1.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析24
• 1.2 結(jié)果24-26
• 1.2.1 psi-H1-shRNA-Wnt4干擾質(zhì)粒的鑒定24-25
• 1.2.2 psi-H1-shRNA-Wnt4干擾質(zhì)粒對(duì)Wnt4基因的抑制作用25-26
• 1.3 討論26-28
• 1.4 小結(jié)28-29
• 二、干擾Wnt4基因后對(duì)人胸腺瘤細(xì)胞凋亡情況的影響29-51
• 2.1 研究對(duì)象和方法29-42
• 2.1.1 研究對(duì)象29
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)用品29-33
• 2.1.3 細(xì)胞培養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)分組33
• 2.1.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染33-34
• 2.1.5 Wright’s-Giemsa’s混合染色34-35
• 2.1.6 Hoechst-33342/PI熒光雙染色35
• 2.1.7 流式細(xì)胞學(xué)分析細(xì)胞凋亡情況35-36
• 2.1.8 Western blot檢測(cè)Caspase-3 及裂解片段36-42
• 2.1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析42
• 2.2 結(jié)果42-48
• 2.2.1 Wright’s-Giemsa’s混合染色結(jié)果42-44
• 2.2.2 Hoechst-33342/PI熒光雙染色結(jié)果44-47
• 2.2.3 流式細(xì)胞學(xué)分析結(jié)果47-48
• 2.2.4 Western blot檢測(cè)Caspase-3 及裂解片段結(jié)果48
• 2.3 討論48-50
• 2.4 小結(jié)50-51
• 三、shRNA-Wnt4質(zhì)粒干擾人胸腺瘤細(xì)胞后對(duì)JNK、β-catenin基因的影響51-60
• 3.1 研究對(duì)象和方法51-55
• 3.1.1 研究對(duì)象51
• 3.1.2 主要實(shí)驗(yàn)用品51-53
• 3.1.3 細(xì)胞培養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)分組53
• 3.1.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染53
• 3.1.5 PCR檢測(cè)Wnt4、β-catenin、JNK在各組中的表達(dá)水平53-54
• 3.1.6 Western blot檢測(cè)Wnt4蛋白、JNK蛋白表達(dá)54-55
• 3.1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析55
• 3.2 結(jié)果55-58
• 3.2.1 β-catenin、JNK普通PCR產(chǎn)物凝膠電泳圖55-56
• 3.2.2 β-catenin、JNK普通PCR產(chǎn)物測(cè)序56
• 3.2.3 shRNA干擾Wnt4基因后對(duì)JNK基因表達(dá)的影響56-57
• 3.2.4 shRNA對(duì)人胸腺瘤細(xì)胞Wnt4蛋白表達(dá)的影響57-58
• 3.2.5 shRNA干擾Wnt4基因后對(duì)JNK蛋白表達(dá)的影響58
• 3.3 討論58-59
• 3.4 小結(jié)59-60
• 結(jié)論60-61
• 參考文獻(xiàn)61-65
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明65-66
• 綜述《細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法研究進(jìn)展》66-77
• 綜述參考文獻(xiàn)73-77
• 致謝77

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 彭艷輝;殷小成;鄧?yán)蚶?;二烯丙基二硫?qū)562細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響[J];腫瘤基礎(chǔ)與臨床;2010年06期

2 李江;萬(wàn)鼎銘;;急性白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中BAG-1及Bcl-2蛋白的表達(dá)[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年01期

3 殷小成;彭艷輝;肖正香;;二烯丙基二硫誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡及與G_2/M期阻滯關(guān)系研究[J];腫瘤藥學(xué);2011年01期

4 趙謙;殷小成;彭艷輝;;二烯丙基二硫誘導(dǎo)人白血病K562細(xì)胞凋亡及其對(duì)Bax、Bag-1表達(dá)的影響[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2012年02期

5 李章志;萬(wàn)楚成;宋斌;張金金;夏云金;;急性白血病患者BAG-1、Survivin表達(dá)及其臨床意義[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2012年05期

6 殷小成;肖正香;彭艷輝;趙謙;陽(yáng)聲芝;劉群策;;DADS上調(diào)K562細(xì)胞p21~(WAF1)表達(dá)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)阻抑和凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2012年03期

7 陽(yáng)聲芝;殷小成;趙謙;劉群策;;二烯丙基二硫作用于K562細(xì)胞后凋亡相關(guān)基因的差異表達(dá)[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年13期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 周敬敬;姜黃素誘導(dǎo)雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞株DU145凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2011年

2 楊晶;二烯丙基二硫下調(diào)uPAR抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、遷移與侵襲[D];南華大學(xué);2011年

3 馮梅燕;DADS下調(diào)uPAR抑制人胃癌MGC803細(xì)胞遷移與侵襲[D];南華大學(xué);2011年

4 楊巧;二烯丙基二硫誘導(dǎo)人胃癌SGC7901/VCR細(xì)胞的耐藥逆轉(zhuǎn)及其機(jī)制[D];南華大學(xué);2011年

5 肖正香;二烯丙基二硫誘導(dǎo)人白血病K562細(xì)胞凋亡及其對(duì)Fas、FasL、Caspase-8表達(dá)的影響[D];南華大學(xué);2011年

6 李江;BAG-1在急性白血病中的表達(dá)及其與BCL-2、BAX的相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2007年

7 王娟;二烯丙基二硫下調(diào)DJ-1抑制人白血病HL-60細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)分化[D];南華大學(xué);2012年

8 趙謙;Bag-1 and Bax在二烯丙基二硫誘導(dǎo)人白血病K562細(xì)胞凋亡中的作用[D];南華大學(xué);2012年

9 陳歆;二烯丙基二硫下調(diào)calreticulin誘導(dǎo)人白血病HL-60細(xì)胞分化[D];南華大學(xué);2013年

10 陽(yáng)聲芝;二烯丙基二硫作用于人白血病K562細(xì)胞后凋亡相關(guān)基因的差異表達(dá)[D];南華大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：993152