本文關(guān)鍵詞：順鉑前藥用于肝細(xì)胞癌靶向治療的研究

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【摘要】：目的肝細(xì)胞癌是臨床上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,化學(xué)治療在肝細(xì)胞癌的治療中發(fā)揮著重要的作用,尤其是中晚期患者的治療。順鉑是臨床上常用的廣譜化療藥物,但由于其半衰期短、水溶性差、毒性大而限制了其在臨床上的廣泛應(yīng)用。為了克服以上缺點(diǎn),本研究設(shè)計(jì)了一種基于普魯蘭多糖的順鉑前藥,以期用于對(duì)肝細(xì)胞癌的靶向治療。內(nèi)容本論文的研究?jī)?nèi)容分為三部分。第一部分為順鉑-琥珀�；蒸斕m多糖高分子前藥CDDP-SUPA的制備及表征。第二部分為CDDP-SUPA的體外研究,包括釋藥特性、細(xì)胞毒性、與DNA的相互作用、對(duì)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響。第三部分為CDDP-SUPA的體內(nèi)研究,包括在正常小鼠體內(nèi)的急性毒性、在肝細(xì)胞癌荷瘤小鼠體內(nèi)的組織分布情況及其抗腫瘤的活性。方法1.制備與表征:通過(guò)兩步酯化反應(yīng)合成高分子前藥CDDP-SUPA。首先,將普魯蘭多糖與琥珀酸苷反應(yīng)生成琥珀酰基普魯蘭多糖(SUPA),再將順鉑(CDDP)通過(guò)酯鍵偶聯(lián)于SUPA,即得CDDP-SUPA;利用IR和1H NMR對(duì)CDDP-SUPA的化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證;采用p H滴定法檢測(cè)SUPA中琥珀�；〈�;采用原子吸收分光光度法測(cè)定CDDP-SUPA分子中CDDP的含量。2.體外實(shí)驗(yàn):采用動(dòng)態(tài)透析法考察CDDP-SUPA的體外釋藥特性。利用CCK8試劑盒檢測(cè)CDDP-SUPA對(duì)肝細(xì)胞癌Hep G2的毒性;將CDDP-SUPA與基因組DNA共孵育,采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(PCR)擴(kuò)增報(bào)告基因,并通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物,考察CDDP-SUPA對(duì)DNA復(fù)制的影響;通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析CDDP-SUPA對(duì)Hep G2細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用,并利用細(xì)胞周期試劑盒分析CDDP-SUPA對(duì)其細(xì)胞周期的影響。3.動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn):考察CDDP-SUPA對(duì)正常小鼠的急性毒性,并通過(guò)HE染色法分析CDDP-SUPA對(duì)肝、腎組織病理學(xué)變化的影響。構(gòu)建肝細(xì)胞癌MHCC-97H裸鼠移植瘤模型,通過(guò)小動(dòng)物活體成像技術(shù)分析熒光標(biāo)記的CDDP-SUPA-Cy5.5在荷瘤小鼠體內(nèi)的組織分布情況;采用尾靜脈注射給藥的方式,評(píng)價(jià)CDDP-SUPA在荷瘤小鼠體內(nèi)的抗腫瘤作用,并通過(guò)HE染色法分析CDDP-SUPA對(duì)腫瘤組織病理學(xué)改變的影響。結(jié)果1.合成了順鉑高分子前藥CDDP-SUPA,其分子中琥珀酰基的取代度為38.2%,CDDP的含量為18.7%。2.與游離CDDP相比,CDDP-SUPA在pH 7.4的PBS緩沖液及含10%人血清p H 7.4的PBS緩沖液(PBS/10%HS)中,均顯著延緩了CDDP的釋放。3.和對(duì)肺癌A549細(xì)胞的作用相比,CDDP-SUPA對(duì)肝細(xì)胞癌Hep G2細(xì)胞的生長(zhǎng)具有更強(qiáng)的抑制作用;CDDP-SUPA顯著地抑制了基因組DNA的復(fù)制,且抑制作用呈現(xiàn)明顯的濃度依賴性;CDDP-SUPA能夠顯著誘導(dǎo)Hep G2細(xì)胞凋亡,并導(dǎo)致細(xì)胞周期的S期阻滯。4.和游離CDDP相比,CDDP-SUPA在15μmol/kg和30μmol/kg CDDP的給藥劑量下顯著延長(zhǎng)了Babl/c小鼠的生存期,并且未發(fā)現(xiàn)其造成小鼠肝腎的組織病理學(xué)變化。5.尾靜脈給藥24 h后,CDDP-SUPA主要分布于MHCC-97H荷瘤小鼠的肝臟與腫瘤組織中;和游離CDDP相比,CDDP-SUPA在3.5μmol/kg和7.0μmol/kg的給藥劑量下表現(xiàn)出對(duì)腫瘤生長(zhǎng)更強(qiáng)的抑制作用。結(jié)論本研究成功合成了基于普魯蘭多糖的高分子前藥CDDP-SUPA,具有較高的載藥量;CDDP-SUPA表現(xiàn)出對(duì)肝細(xì)胞癌較高的體外選擇性,能夠有效地抑制Hep G2細(xì)胞的體外生長(zhǎng);和游離藥物相比,CDDP-SUPA表現(xiàn)出更低的毒性,顯著延長(zhǎng)了小鼠的生存時(shí)間;尾靜脈注射給藥后,CDDP-SUPA主要分布于肝細(xì)胞癌MHCC-97H荷瘤小鼠的肝臟和腫瘤組織,并能夠顯著抑制腫瘤的體內(nèi)生長(zhǎng)。因此,本研究合成的CDDP-SUPA是一種性質(zhì)優(yōu)良的高分子前藥,有望用于肝細(xì)胞癌的靶向治療。
【關(guān)鍵詞】：順鉑 普魯蘭多糖 前藥 肝細(xì)胞癌 靶向治療
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明11-12
• 前言12-14
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、高分子前藥CDDP-SUPA的制備及表征14-22
• 1.1 對(duì)象和方法14-16
• 1.1.1 材料與儀器14
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法14-15
• 1.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析15-16
• 1.2 結(jié)果16-19
• 1.2.1 高分子前藥CDDP-SUPA的結(jié)構(gòu)確證16-18
• 1.2.2 SUPA中琥珀酰基基團(tuán)DS的測(cè)定18-19
• 1.2.3 CDDP-SUPA中CDDP含量的測(cè)定19
• 1.3 討論19-21
• 1.3.1 高分子前藥CDDP-SUPA的制備19-20
• 1.3.2 CDDP-SUPA中CDDP含量的測(cè)定20-21
• 1.4 小結(jié)21-22
• 二、高分子前藥CDDP-SUPA的體外研究22-36
• 2.1 對(duì)象和方法22-26
• 2.1.1 材料與儀器22
• 2.1.2 基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)22-25
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)方法25-26
• 2.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析26
• 2.2 結(jié)果26-33
• 2.2.1 CDDP-SUPA中CDDP釋放的體外考察26-27
• 2.2.2 CDDP-SUPA的體外細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)27-29
• 2.2.3 CDDP-SUPA對(duì)DNA復(fù)制的阻滯作用29-30
• 2.2.4 細(xì)胞凋亡分析30-31
• 2.2.5 細(xì)胞周期分析31-33
• 2.3 討論33-35
• 2.3.1 CDDP-SUPA中CDDP釋放的體外考察33
• 2.3.2 CDDP-SUPA的體外細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)33
• 2.3.3 CDDP-SUPA對(duì)DNA復(fù)制的阻滯作用33-34
• 2.3.4 細(xì)胞凋亡與周期分析34-35
• 2.4 小結(jié)35-36
• 三、高分子前藥CDDP-SUPA的體內(nèi)研究36-44
• 3.1 對(duì)象和方法36-38
• 3.1.1 材料與儀器36
• 3.1.2 基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)36-37
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)方法37-38
• 3.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析38
• 3.2 結(jié)果38-42
• 3.2.1 CDDP-SUPA在小鼠中急性毒性的研究38-39
• 3.2.2 CDDP-SUPA的體內(nèi)抗腫瘤活性的研究39-41
• 3.2.3 CDDP-SUPA在荷瘤鼠中的分布41-42
• 3.3 討論42-43
• 3.4 小結(jié)43-44
• 全文結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明49-50
• 綜述50-69
• 綜述參考文獻(xiàn)63-69
• 致謝69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 楊柳;生物可吸收聚乳酸—聚乙二醇嵌段共聚物自組裝納米膠束藥物控釋體系研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

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本文編號(hào)：992610