本文關鍵詞：順鉑前藥用于肝細胞癌靶向治療的研究

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【摘要】：目的肝細胞癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一,化學治療在肝細胞癌的治療中發(fā)揮著重要的作用,尤其是中晚期患者的治療。順鉑是臨床上常用的廣譜化療藥物,但由于其半衰期短、水溶性差、毒性大而限制了其在臨床上的廣泛應用。為了克服以上缺點,本研究設計了一種基于普魯蘭多糖的順鉑前藥,以期用于對肝細胞癌的靶向治療。內容本論文的研究內容分為三部分。第一部分為順鉑-琥珀�；蒸斕m多糖高分子前藥CDDP-SUPA的制備及表征。第二部分為CDDP-SUPA的體外研究,包括釋藥特性、細胞毒性、與DNA的相互作用、對細胞凋亡及細胞周期的影響。第三部分為CDDP-SUPA的體內研究,包括在正常小鼠體內的急性毒性、在肝細胞癌荷瘤小鼠體內的組織分布情況及其抗腫瘤的活性。方法1.制備與表征:通過兩步酯化反應合成高分子前藥CDDP-SUPA。首先,將普魯蘭多糖與琥珀酸苷反應生成琥珀�；蒸斕m多糖(SUPA),再將順鉑(CDDP)通過酯鍵偶聯(lián)于SUPA,即得CDDP-SUPA;利用IR和1H NMR對CDDP-SUPA的化學結構進行確證;采用p H滴定法檢測SUPA中琥珀�；〈�;采用原子吸收分光光度法測定CDDP-SUPA分子中CDDP的含量。2.體外實驗:采用動態(tài)透析法考察CDDP-SUPA的體外釋藥特性。利用CCK8試劑盒檢測CDDP-SUPA對肝細胞癌Hep G2的毒性;將CDDP-SUPA與基因組DNA共孵育,采用聚合酶鏈式反應技術(PCR)擴增報告基因,并通過瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物,考察CDDP-SUPA對DNA復制的影響;通過流式細胞術分析CDDP-SUPA對Hep G2細胞凋亡的誘導作用,并利用細胞周期試劑盒分析CDDP-SUPA對其細胞周期的影響。3.動物體內實驗:考察CDDP-SUPA對正常小鼠的急性毒性,并通過HE染色法分析CDDP-SUPA對肝、腎組織病理學變化的影響。構建肝細胞癌MHCC-97H裸鼠移植瘤模型,通過小動物活體成像技術分析熒光標記的CDDP-SUPA-Cy5.5在荷瘤小鼠體內的組織分布情況;采用尾靜脈注射給藥的方式,評價CDDP-SUPA在荷瘤小鼠體內的抗腫瘤作用,并通過HE染色法分析CDDP-SUPA對腫瘤組織病理學改變的影響。結果1.合成了順鉑高分子前藥CDDP-SUPA,其分子中琥珀�；娜〈葹�38.2%,CDDP的含量為18.7%。2.與游離CDDP相比,CDDP-SUPA在pH 7.4的PBS緩沖液及含10%人血清p H 7.4的PBS緩沖液(PBS/10%HS)中,均顯著延緩了CDDP的釋放。3.和對肺癌A549細胞的作用相比,CDDP-SUPA對肝細胞癌Hep G2細胞的生長具有更強的抑制作用;CDDP-SUPA顯著地抑制了基因組DNA的復制,且抑制作用呈現(xiàn)明顯的濃度依賴性;CDDP-SUPA能夠顯著誘導Hep G2細胞凋亡,并導致細胞周期的S期阻滯。4.和游離CDDP相比,CDDP-SUPA在15μmol/kg和30μmol/kg CDDP的給藥劑量下顯著延長了Babl/c小鼠的生存期,并且未發(fā)現(xiàn)其造成小鼠肝腎的組織病理學變化。5.尾靜脈給藥24 h后,CDDP-SUPA主要分布于MHCC-97H荷瘤小鼠的肝臟與腫瘤組織中;和游離CDDP相比,CDDP-SUPA在3.5μmol/kg和7.0μmol/kg的給藥劑量下表現(xiàn)出對腫瘤生長更強的抑制作用。結論本研究成功合成了基于普魯蘭多糖的高分子前藥CDDP-SUPA,具有較高的載藥量;CDDP-SUPA表現(xiàn)出對肝細胞癌較高的體外選擇性,能夠有效地抑制Hep G2細胞的體外生長;和游離藥物相比,CDDP-SUPA表現(xiàn)出更低的毒性,顯著延長了小鼠的生存時間;尾靜脈注射給藥后,CDDP-SUPA主要分布于肝細胞癌MHCC-97H荷瘤小鼠的肝臟和腫瘤組織,并能夠顯著抑制腫瘤的體內生長。因此,本研究合成的CDDP-SUPA是一種性質優(yōu)良的高分子前藥,有望用于肝細胞癌的靶向治療。
【關鍵詞】：順鉑 普魯蘭多糖 前藥 肝細胞癌 靶向治療
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-12
• 前言12-14
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、高分子前藥CDDP-SUPA的制備及表征14-22
• 1.1 對象和方法14-16
• 1.1.1 材料與儀器14
• 1.1.2 實驗方法14-15
• 1.1.3 統(tǒng)計學分析15-16
• 1.2 結果16-19
• 1.2.1 高分子前藥CDDP-SUPA的結構確證16-18
• 1.2.2 SUPA中琥珀�；鶊FDS的測定18-19
• 1.2.3 CDDP-SUPA中CDDP含量的測定19
• 1.3 討論19-21
• 1.3.1 高分子前藥CDDP-SUPA的制備19-20
• 1.3.2 CDDP-SUPA中CDDP含量的測定20-21
• 1.4 小結21-22
• 二、高分子前藥CDDP-SUPA的體外研究22-36
• 2.1 對象和方法22-26
• 2.1.1 材料與儀器22
• 2.1.2 基本實驗技術22-25
• 2.1.3 實驗方法25-26
• 2.1.4 統(tǒng)計學分析26
• 2.2 結果26-33
• 2.2.1 CDDP-SUPA中CDDP釋放的體外考察26-27
• 2.2.2 CDDP-SUPA的體外細胞毒性評價27-29
• 2.2.3 CDDP-SUPA對DNA復制的阻滯作用29-30
• 2.2.4 細胞凋亡分析30-31
• 2.2.5 細胞周期分析31-33
• 2.3 討論33-35
• 2.3.1 CDDP-SUPA中CDDP釋放的體外考察33
• 2.3.2 CDDP-SUPA的體外細胞毒性評價33
• 2.3.3 CDDP-SUPA對DNA復制的阻滯作用33-34
• 2.3.4 細胞凋亡與周期分析34-35
• 2.4 小結35-36
• 三、高分子前藥CDDP-SUPA的體內研究36-44
• 3.1 對象和方法36-38
• 3.1.1 材料與儀器36
• 3.1.2 基本實驗技術36-37
• 3.1.3 實驗方法37-38
• 3.1.4 統(tǒng)計學分析38
• 3.2 結果38-42
• 3.2.1 CDDP-SUPA在小鼠中急性毒性的研究38-39
• 3.2.2 CDDP-SUPA的體內抗腫瘤活性的研究39-41
• 3.2.3 CDDP-SUPA在荷瘤鼠中的分布41-42
• 3.3 討論42-43
• 3.4 小結43-44
• 全文結論44-45
• 參考文獻45-49
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明49-50
• 綜述50-69
• 綜述參考文獻63-69
• 致謝69

【參考文獻】

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊柳;生物可吸收聚乳酸—聚乙二醇嵌段共聚物自組裝納米膠束藥物控釋體系研究[D];復旦大學;2010年

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本文編號：992610