本文關鍵詞：PLCE1在食管鱗癌組織中的表達及其對腫瘤細胞增殖和侵襲的影響研究

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【摘要】：目的:探討PLCE1在食管鱗癌、癌旁正常組織中的表達及臨床意義;下調PLCE1基因對食管鱗癌細胞增殖和侵襲調控的影響。方法:收集100例漢族食管鱗癌組織及與其對應的99例癌旁正常組織,應用免疫組化Envision法檢測PLCE1蛋白表達,并分析其與食管鱗癌臨床病理參數(shù)及與食管鱗癌患者預后的關系;用PLCE1特異性的si RNA轉染食管鱗癌細胞系Eca109、EC9706,應用q RT-PCR、Westem blot及免疫熒光檢測si RNA對食管鱗癌細胞PLCE1的干擾效率;轉染48小時后,MTT法和單克隆形成實驗檢測細胞增殖情況,流式細胞術檢測細胞凋亡情況,transwell侵襲實驗檢測細胞的侵襲能力;Westem blot檢測與凋亡相關蛋白及上皮間葉轉化相關標記物的蛋白表達情況。結果:(1)PLCE1蛋白在食管鱗癌組織中的表達明顯高于癌旁正常組織,并且發(fā)現(xiàn)PLCE1高表達與臨床TNM分期及淋巴結的轉移有關,且PLCE1高表達組比低表達組預后差。(2)選擇轉染效率高的2條PLCE1-si RNA混合后轉染食管鱗癌細胞,q RT-PCR、Westem blot及免疫熒光顯示,將這兩條si RNA混合后轉染食管鱗癌細胞均能抑制PLCE1 m RNA和蛋白的表達量,轉染PLCE1-si RNA48小時后,MTT實驗結果顯示轉染的食管鱗癌細胞株與對照組相比,實驗組細胞的增殖受到明顯抑制,單克隆形成實驗顯示實驗組的細胞團數(shù)明顯減少,流式細胞術實驗顯示經(jīng)過PLCE1-si RNA轉染的食管鱗癌細胞株與對照組相比,早期和晚期凋亡的比率明顯升高,利用Westem blot進一步檢測凋亡相關分子Bax,BCL-2和cleaved-PARP的蛋白表達情況,結果顯示沉默了PLCE1基因的食管鱗癌細胞株中促凋亡蛋白Bax和凋亡標記物cleaved-PARP的蛋白表達量明顯增高,而抗凋亡蛋白BCL-2蛋白的表達量明顯降低。Transwell實驗顯示,與對照組相比,轉染PLCE1-si RNA的食管鱗癌細胞株的侵襲能力明顯降低;Westem blot檢測上皮間葉相關標記物,結果發(fā)現(xiàn),PLCE1基因被干擾后,其上皮的標記物E-cadherin明顯升高,而間葉的標記物Vimentin則明顯下降。結論:(1)PLCE1蛋白在食管鱗癌組織中的表達高于癌旁正常組織,PLCE1蛋白的高表達與食管鱗癌的淋巴結轉移和TNM分期有關,且其高表達與食管鱗癌患者預后差密切相關。(2)下調PLCE1基因可抑制食管鱗癌細胞的增殖,促進食管鱗癌細胞的凋亡,提示PLCE1可能參與食管鱗癌細胞的增殖調控;下調PLCE1基因可顯著抑制食管鱗癌細胞的侵襲,并且可能通過調控上皮間葉轉化來調控食管鱗癌細胞的侵襲轉移。
【關鍵詞】：食管鱗癌 PLCE1 免疫組化 RNA干擾 增殖 侵襲
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• 英文摘要5-8
• 縮略詞一覽表8-9
• 前言9-12
• 材料與方法12-25
• 1. 材料12-15
• 1.1 研究對象12-13
• 1.2 主要試劑與耗材13-14
• 1.3 設計合成si RNA14-15
• 2. 方法15-25
• 2.1 臨床病理學研容內容和方法15-16
• 2.2 組織芯片制備技術16
• 2.3 免疫組織化學方法16-18
• 2.4 細胞培養(yǎng)18
• 2.5 小干擾RNA轉染18-19
• 2.6 實時定量PCR步驟19-20
• 2.7 Western Blot檢測20-23
• 2.8 免疫熒光實驗23
• 2.9 MTT測細胞生長曲線23
• 2.10 克隆形成實驗23
• 2.11 流式細胞儀檢測細胞的凋亡23-24
• 2.12 Transwell侵襲實驗24
• 2.13 統(tǒng)計方法24-25
• 結果25-34
• 1.食管鱗癌及癌旁正常組織中PLCE1蛋白的表達及與臨床病理參數(shù)之間的關系25-28
• 2.PLCE1特異性si RNA轉染食管鱗癌細胞后PLCE1下調28-29
• 3.干擾PLCE1表達對食管鱗癌細胞增殖和凋亡的影響29-32
• 4.干擾PLCE1表達對食管鱗癌細胞侵襲的影響32-34
• 討論34-38
• 結論38-39
• 參考文獻39-44
• 文獻綜述44-52
• 參考文獻49-52
• 致謝52-53
• 作者簡介53-54
• 附件54

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1 鈕小玲;黃文彥;;PLCE1基因突變與激素耐藥性腎病綜合征的關系[J];國際病理科學與臨床雜志;2009年04期

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1 李肅;PLCE1在食管鱗癌組織中的表達及其對腫瘤細胞增殖和侵襲的影響研究[D];石河子大學;2015年

2 吳磊;PLCE1在胃癌中的表達及其意義[D];華中科技大學;2011年

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本文編號：991782