本文關(guān)鍵詞：PLCE1在食管鱗癌組織中的表達(dá)及其對腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲的影響研究

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【摘要】：目的:探討PLCE1在食管鱗癌、癌旁正常組織中的表達(dá)及臨床意義;下調(diào)PLCE1基因?qū)κ彻荀[癌細(xì)胞增殖和侵襲調(diào)控的影響。方法:收集100例漢族食管鱗癌組織及與其對應(yīng)的99例癌旁正常組織,應(yīng)用免疫組化Envision法檢測PLCE1蛋白表達(dá),并分析其與食管鱗癌臨床病理參數(shù)及與食管鱗癌患者預(yù)后的關(guān)系;用PLCE1特異性的si RNA轉(zhuǎn)染食管鱗癌細(xì)胞系Eca109、EC9706,應(yīng)用q RT-PCR、Westem blot及免疫熒光檢測si RNA對食管鱗癌細(xì)胞PLCE1的干擾效率;轉(zhuǎn)染48小時后,MTT法和單克隆形成實驗檢測細(xì)胞增殖情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況,transwell侵襲實驗檢測細(xì)胞的侵襲能力;Westem blot檢測與凋亡相關(guān)蛋白及上皮間葉轉(zhuǎn)化相關(guān)標(biāo)記物的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:(1)PLCE1蛋白在食管鱗癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織,并且發(fā)現(xiàn)PLCE1高表達(dá)與臨床TNM分期及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移有關(guān),且PLCE1高表達(dá)組比低表達(dá)組預(yù)后差。(2)選擇轉(zhuǎn)染效率高的2條PLCE1-si RNA混合后轉(zhuǎn)染食管鱗癌細(xì)胞,q RT-PCR、Westem blot及免疫熒光顯示,將這兩條si RNA混合后轉(zhuǎn)染食管鱗癌細(xì)胞均能抑制PLCE1 m RNA和蛋白的表達(dá)量,轉(zhuǎn)染PLCE1-si RNA48小時后,MTT實驗結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染的食管鱗癌細(xì)胞株與對照組相比,實驗組細(xì)胞的增殖受到明顯抑制,單克隆形成實驗顯示實驗組的細(xì)胞團(tuán)數(shù)明顯減少,流式細(xì)胞術(shù)實驗顯示經(jīng)過PLCE1-si RNA轉(zhuǎn)染的食管鱗癌細(xì)胞株與對照組相比,早期和晚期凋亡的比率明顯升高,利用Westem blot進(jìn)一步檢測凋亡相關(guān)分子Bax,BCL-2和cleaved-PARP的蛋白表達(dá)情況,結(jié)果顯示沉默了PLCE1基因的食管鱗癌細(xì)胞株中促凋亡蛋白Bax和凋亡標(biāo)記物cleaved-PARP的蛋白表達(dá)量明顯增高,而抗凋亡蛋白BCL-2蛋白的表達(dá)量明顯降低。Transwell實驗顯示,與對照組相比,轉(zhuǎn)染PLCE1-si RNA的食管鱗癌細(xì)胞株的侵襲能力明顯降低;Westem blot檢測上皮間葉相關(guān)標(biāo)記物,結(jié)果發(fā)現(xiàn),PLCE1基因被干擾后,其上皮的標(biāo)記物E-cadherin明顯升高,而間葉的標(biāo)記物Vimentin則明顯下降。結(jié)論:(1)PLCE1蛋白在食管鱗癌組織中的表達(dá)高于癌旁正常組織,PLCE1蛋白的高表達(dá)與食管鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān),且其高表達(dá)與食管鱗癌患者預(yù)后差密切相關(guān)。(2)下調(diào)PLCE1基因可抑制食管鱗癌細(xì)胞的增殖,促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞的凋亡,提示PLCE1可能參與食管鱗癌細(xì)胞的增殖調(diào)控;下調(diào)PLCE1基因可顯著抑制食管鱗癌細(xì)胞的侵襲,并且可能通過調(diào)控上皮間葉轉(zhuǎn)化來調(diào)控食管鱗癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：食管鱗癌 PLCE1 免疫組化 RNA干擾 增殖 侵襲
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• 英文摘要5-8
• 縮略詞一覽表8-9
• 前言9-12
• 材料與方法12-25
• 1. 材料12-15
• 1.1 研究對象12-13
• 1.2 主要試劑與耗材13-14
• 1.3 設(shè)計合成si RNA14-15
• 2. 方法15-25
• 2.1 臨床病理學(xué)研容內(nèi)容和方法15-16
• 2.2 組織芯片制備技術(shù)16
• 2.3 免疫組織化學(xué)方法16-18
• 2.4 細(xì)胞培養(yǎng)18
• 2.5 小干擾RNA轉(zhuǎn)染18-19
• 2.6 實時定量PCR步驟19-20
• 2.7 Western Blot檢測20-23
• 2.8 免疫熒光實驗23
• 2.9 MTT測細(xì)胞生長曲線23
• 2.10 克隆形成實驗23
• 2.11 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡23-24
• 2.12 Transwell侵襲實驗24
• 2.13 統(tǒng)計方法24-25
• 結(jié)果25-34
• 1.食管鱗癌及癌旁正常組織中PLCE1蛋白的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系25-28
• 2.PLCE1特異性si RNA轉(zhuǎn)染食管鱗癌細(xì)胞后PLCE1下調(diào)28-29
• 3.干擾PLCE1表達(dá)對食管鱗癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響29-32
• 4.干擾PLCE1表達(dá)對食管鱗癌細(xì)胞侵襲的影響32-34
• 討論34-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-44
• 文獻(xiàn)綜述44-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 致謝52-53
• 作者簡介53-54
• 附件54

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1 鈕小玲;黃文彥;;PLCE1基因突變與激素耐藥性腎病綜合征的關(guān)系[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2009年04期

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1 李肅;PLCE1在食管鱗癌組織中的表達(dá)及其對腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲的影響研究[D];石河子大學(xué);2015年

2 吳磊;PLCE1在胃癌中的表達(dá)及其意義[D];華中科技大學(xué);2011年

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本文編號：991782