本文關(guān)鍵詞：模擬缺血再灌注損傷誘導(dǎo)Hepg2細胞多藥耐藥相關(guān)基因與蛋白的表達及意義

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【摘要】：目的:我國肝細胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)的發(fā)病率及死亡率僅次于肺癌。我國HCC多發(fā)現(xiàn)于中晚期。化療是治療進展期HCC、晚期HCC主要手段之一。相關(guān)研究表明目前多數(shù)HCC對化療不敏感,多藥耐藥(Multidrug Resistance,MDR)相關(guān)基因及蛋白的高表達是主要原因之一。在HCC的規(guī)范化治療中,手術(shù)切除和肝移植為主的綜合治療仍然是主要手段,手術(shù)過程中常常會使用肝門阻斷甚至是全肝血流控制以有效的減少出血,但肝臟恢復(fù)供血后會出現(xiàn)缺血再灌注損傷(Ischemia Reperfusion Injury,IRI),如果損傷嚴重反而會增加手術(shù)風(fēng)險甚至導(dǎo)致術(shù)后肝衰竭。有研究表明腫瘤細胞細胞長處于缺氧、低糖的微環(huán)境中其MDR相關(guān)基因和蛋白的表達會增加,導(dǎo)致化療效果差甚至耐藥,而且缺氧會引起缺氧誘導(dǎo)因子1α(Hypoxia-Inducible Factor 1α,HIF-1α)的表達。研究發(fā)現(xiàn)HIF-1α可以調(diào)控MDR相關(guān)基因表達,沉默或者增強HIF-1α的表達,可以降低或者增強MDR相關(guān)基因的表達,表明HIF-1α是導(dǎo)致腫瘤細胞MDR的原因之一。因此為了進一步深入了解IRI對Hepg2細胞MDR的影響,本實驗采用Hepg2細胞模擬缺血再灌注損傷模型,探索IRI對Hepg2細胞MDR相關(guān)基因、蛋白以及HIF-1α的影響,探討HIF-1α與多耐藥基因1(Multidrug Resistance Gene1,MDR1)、多藥耐藥蛋白2(Multidrug Resistance associated Protein 2,MRP2)、肺耐藥蛋白(Lung Resistance Protein,LRP)的關(guān)系。方法:建立體外Hepg2細胞模擬缺血再灌注損傷模型。細胞分組情況:空白對照組,無缺血、再灌處理;缺血再灌注實驗組,均予以缺血40min處理,分別再灌注0h、6h、12h、24h、48h處理。光鏡下觀察hepg2細胞干預(yù)后形態(tài)改變。實時熒光定量pcr檢測mdr1、mrp2、lrp以及hif-1α基因表達,westblot法檢測hepg2細胞p-糖蛋白(p-glycoprotein,p-gp)、mrp2、lrp、hif-1α蛋白的表達。采用統(tǒng)計分析軟件spss17.0進行對所有數(shù)據(jù)分析,組間比較單因素方差分析(one-wayanova檢驗)。檢驗水準α=0.05,p0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:模擬缺血再灌注損傷后細胞形態(tài)較正常細胞形態(tài)不一,死細胞明顯增多,細胞間隙增寬。各實驗組分別與空白對照組比較:從ir-6h組開始mdr1表達具有統(tǒng)計學(xué)差異(f=116.16,p0.05),最高的ir-48h組為對照組3倍;從ir-0h組開始mrp2基因表達具有統(tǒng)計學(xué)差異(f=133.81,p0.05),最高的ir-48h組為對照組2.5倍;從ir-12h組開始lrp基因表達具有統(tǒng)計學(xué)差異(f=146.64,p0.05),最高的ir-48h組為對照組3倍;從ir-24h組開始hif-1α基因表達具有統(tǒng)計學(xué)差異(f=113.01,p0.05),最高的ir-48h組為對照組3倍。從ir-0h組開始p-gp表達具有統(tǒng)計學(xué)差異(f=83.75,p0.05),最高的ir-48h組為對照組5倍;從ir-0h組開始mrp2蛋白表達具有統(tǒng)計學(xué)差異(f=52.70,p0.05),最高的ir-48h組為對照組2倍;從ir-48h組開始lrp蛋白表達具有統(tǒng)計學(xué)差異(f=2.01,p0.05),最高的ir-48h組為對照組17倍;從ir-0h組開始hif-1α蛋白表達具有統(tǒng)計學(xué)差異(f=88.44,p0.05),最高的ir-12h組為對照組1.9倍。結(jié)論:1.模擬缺血再灌注參與了hepg2細胞mdr相關(guān)基因mdr1、mrp2、lrp以及其相應(yīng)蛋白p-gp、mrp2、lrp的表達增加;2.模擬缺血再灌注可以誘導(dǎo)hepg2細胞hif-1α的基因和蛋白表達增加;3.模擬缺血再灌注誘驗證了HIF-1α對MDR1表達的調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：缺血再灌注 缺氧誘導(dǎo)因子1α 多藥耐藥
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• 英文摘要6-9
• 前言9-15
• 材料與方法15-25
• 結(jié)果25-35
• 討論35-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻43-50
• 英漢縮略詞對照表50-51
• 致謝51-53
• 肝缺血再灌注損傷機制及相關(guān)保護措施的研究進展(綜述)53-69
• 參考文獻63-69

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：989493