本文關(guān)鍵詞：JQ1對Ph陽性急性淋巴細胞白血病細胞株SUP-B15的增殖抑制和相關(guān)作用機制研究

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【摘要】：目的:Ph陽性急性淋巴細胞白血病(Ph+ALL)是急性淋巴白血病中,預(yù)后較差的類型之一,化療及靶向藥物治療雖然能夠一定程度控制疾病的發(fā)展,但是多數(shù)會由于耐藥等問題復(fù)發(fā),所以尋找更好的治療方法是十分必要。近年來國外研究發(fā)現(xiàn)JQ1(溴區(qū)抑制劑)可抑制慢性髓細胞白血病(CML)耐藥的BCR-ABLT315I(T315基因突變)細胞活性,增加其凋亡率,同時抑制布羅莫結(jié)構(gòu)域4(Brd4),降低myc的m RNA水平及myc的結(jié)合活性,克服CML耐藥;而Ph+ALL也具有與CML相似BCR-ABL基因的突變,那么Brd4抑制劑JQ1對Ph+ALL是否有同樣的作用,該研究國內(nèi)外少見研究報道。本研究擬采用JQ1作用于Ph+ALL細胞株(SUP-B15),通過光鏡下進行細胞形態(tài)學(xué)的觀察、MTT(四甲基偶氮唑藍)法檢測JQ1作用于SUP-B15細胞株的半數(shù)抑制濃度、FCM(流式細胞術(shù))檢測細胞凋亡率、采用熒光定量PCR檢測BCR-ABL,同時檢測Brd4及其下游兩個通道基因表達即myc、P53m RNA基因的表達。目的是探討JQ1對Ph+ALL細胞株的可能作用機制,為臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ),為Ph+ALL的治療探索一個新的靶向治療方法及提供新的思路。方法:1.MTT(四甲基偶氮唑藍)法檢測JQ1作用于SUP-B15的細胞后,細胞的增殖抑制率;2.Annexin V-FITC/PI熒光染色FCM(流式細胞術(shù))檢測JQ1作用于SUP-B15細胞后,細胞的凋亡率的改變;3.實時熒光定量PCR(Real-time PCR)檢測JQ1作用于SUP-B15細胞后,細胞的相關(guān)基因BCR-ABLm RNA、Brd4m RNA、mycm RNA以及P53m RNA的表達。結(jié)果:1.MTT(四甲基偶氮唑藍)法檢測得到的結(jié)果為:不同濃度JQ1處理SUP-B15細胞24h、48h、72h后,各實驗組與對照組相比,JQ1對細胞有明顯的增殖抑制作用,并且隨著作用時間延長及JQ1藥物濃度增加,細胞的增殖抑制率呈現(xiàn)升高趨勢,可以發(fā)現(xiàn)呈現(xiàn)時間-劑量依賴性,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)軟件進行處理后發(fā)現(xiàn)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05且0.01)。其48h半數(shù)抑制濃度(IC50)為2.576umol/L。2.FCM(流式細胞術(shù))法檢測得到的結(jié)果為:熒光染色流式細胞術(shù)檢測,實驗重復(fù)三次后48h平均凋亡率分別為對照組(3.57±0.95)%、1umol/L實驗組(19.90±1.40)%、4umol/L實驗組(35.77±1.72)%,72h平均凋亡率分別為對照組(17.77±1.75)%、1umol/L實驗組(36.40±2.29)%、4umol/L實驗組(78.83±1.40)%,且各時段兩個實驗組凋亡率明顯比對照組高,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)軟件進行處理后發(fā)現(xiàn)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F48=925.275,F72=858.642,P均0.05且0.01)。3.實時熒光定量PCR檢測得到的結(jié)果如下:SUP-B15細胞分別經(jīng)1umol/L及4umol/L的JQ1處理48h后,BCR-ABLm RNA、Brd4m RNA、mycm RNA表達量較對照組明顯下降,1umol/L組分別下降65.67%、8.67%、38.67%,4umol/L分別下降90.00%、67.00%、90.67%;而P53m RNA的表達則隨著濃度增加逐漸增高,在1umol/L及4umol/L組分別增高206.33%、278.33%。各實驗組與對照組相比,上述四個指標方面,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)軟件進行處理后發(fā)現(xiàn)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:1.JQ1作用于SUP-B15細胞后表現(xiàn)為對其明顯的增殖抑制作用,表明其可以誘導(dǎo)SUP-B15細胞發(fā)生凋亡;2.JQ1可通過下調(diào)Brd4 m RNA的表達,從而影響其下游基因myc m RNA及P53m RNA的表達,提示JQ1作用于SUP-B15細胞后,對以上三個基因的表達均具有明顯作用,證明Brd4→myc→P53途徑可能是JQ1誘導(dǎo)SUP-B15細胞發(fā)生凋亡的途徑之一;3.JQ1可以有效降低SUP-B15細胞株的BCR-ABL m RNA的轉(zhuǎn)錄水平,提示該藥對BCR-ABL m RNA表達有明顯作用,這可能是細胞凋亡的另一途徑。
【關(guān)鍵詞】：JQ1 布羅莫結(jié)構(gòu)域4 SUP-B15細胞 急性淋巴細胞白血病
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.71
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 1 材料和方法13-20
• 1.1 材料13-14
• 1.2 方法14-20
• 2 結(jié)果20-26
• 2.1 JQ1 對SUP-B15 細胞增殖的抑制作用20
• 2.2 JQ1 對SUP-B15 細胞凋亡的影響20-22
• 2.3 JQ1 作用于SUP-B15 細胞后對基因表達的影響22-26
• 3 討論26-30
• 4 結(jié)論30-31
• 參考文獻31-35
• 綜述35-49
• 參考文獻44-49
• 致謝49-50
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果50-51
• 個人簡歷51

【參考文獻】

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1 陳國柱;于曉Y，

本文編號：989506