本文關(guān)鍵詞：甲狀旁腺激素對卵巢癌的作用及其機(jī)制研究

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【摘要】：卵巢癌是致死率較高的女性疾病之一,由于卵巢癌早期難以診斷,等到出現(xiàn)身體癥狀就診時多已發(fā)展為晚期,往往取不到理想的治療效果。因此,卵巢癌的死亡率目前已位居婦科癌癥第三位。甲狀旁腺激素(PTH),是一種多肽類激素,具有堿性單鏈結(jié)構(gòu)由甲狀旁腺分泌,它的主要功能是調(diào)節(jié)人體內(nèi)鈣和磷的代謝水平,促血鈣,降血磷,維持體內(nèi)的鈣磷平衡。多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展都與甲狀旁腺激素的分泌水平有密切關(guān)系其中,卵巢癌與甲狀旁腺激素的關(guān)系已經(jīng)引起了學(xué)術(shù)界的關(guān)注。有研究報道指出PTH對卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展都有一定的影響。甲狀旁腺亢進(jìn)癥多是由于人體中甲狀旁腺激素分泌過多引起的,與性別關(guān)系密切,在女性尤為多見,男女發(fā)病比例可達(dá)到1：2-4,尤其以圍絕經(jīng)期及絕經(jīng)期以后婦女高發(fā)。作為女性健康殺手的卵巢癌,目前有研究發(fā)現(xiàn)PTH可能通過TGF-beta 1影響它的細(xì)胞活力。當(dāng)前,很多臨床研究表明甲狀旁腺激素與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展有相關(guān)性。鑒于目前國內(nèi)外對卵巢癌的治療手段大多還停留在放療、化療及手術(shù)治療,藥物治療只是作為輔助療法,應(yīng)用并不普遍,而且這些藥物大都存在選擇性差、有副作用、長期服用具有耐藥性等缺點(diǎn),因此,我們從PTH對卵巢癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、細(xì)胞凋亡等方面的影響為切人點(diǎn),探索PTH對卵巢癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和干細(xì)胞干性的作用及其作用機(jī)制,并試圖通過以上幾個方面的研究為臨床開發(fā)靶向藥物提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù),這項(xiàng)研究有著重要的科學(xué)意義和應(yīng)用價值。我們通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)分析了PTH對卵巢癌細(xì)胞系ES2及skov3的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)PTH能顯著促進(jìn)這兩種細(xì)胞系的增殖,之后我們進(jìn)一步通過細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),PTH能夠促進(jìn)skov3及ES2細(xì)胞株的遷移能力和侵襲能力。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,PTH處理過的skov3及ES2較空白對照組相比,細(xì)胞凋亡明顯減少,說明PTH具有抑制卵巢癌細(xì)胞凋亡的作用。蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)(Western Blotting)顯示PTH處理過的skov3及ES2細(xì)胞系中AKT及磷酸化的AKT表達(dá)增多ERK及磷酸化的ERK表達(dá)增多,通過PTH促進(jìn)這些重要信號通路關(guān)鍵蛋白的表達(dá),我們推測PTH對skov3及ES2的增殖、凋亡、侵襲等作用可能與PI3K/AKT信號通路以及ERK1/2信號通路的激活有關(guān)。蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)(Western Blotting)證實(shí)snail、 N-cad、Vemention等EMT marker在經(jīng)PTH處理過的skov3及ES2細(xì)胞系中高表達(dá)。為了進(jìn)一步證實(shí)PTH能促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,我們又進(jìn)行了qRT-PCR實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)經(jīng)過PTH處理的樣品中snail、N-cad、Vemention等基因在mRNA層面也出現(xiàn)了高表達(dá)。綜上,我們認(rèn)為PTH能促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,加速腫瘤分化。通過腫瘤干細(xì)胞微球形成實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)PTH處理過的skov3及ES2細(xì)胞株成瘤率明顯高于未經(jīng)處理的skov3及ES2細(xì)胞株,可以確定PTH促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞的形成。我們進(jìn)一步通過蛋白質(zhì)印跡(Western Blotting)檢測了OCT-4、Sox2、Bmi1等干細(xì)胞marker.Western Blotting結(jié)果顯示,經(jīng)PTH處理的細(xì)胞較對照組相比,OCT-4. Sox2、 Bmi1等干細(xì)胞marker均出現(xiàn)了高表達(dá),這個現(xiàn)象在qRT-PCR實(shí)驗(yàn)中也得到了印證,OCT-4、Sox2、Bmi1等干細(xì)胞marker在mRNA層面同樣出現(xiàn)了高表達(dá),以上一系列實(shí)驗(yàn)表明,PTH促進(jìn)卵巢癌腫瘤干細(xì)胞形成,對腫瘤干細(xì)胞干性有深刻重要影響。在我們的研究中,PTH顯著提高卵巢癌的增殖、侵襲以及遷移能力,能夠使細(xì)胞凋亡受到抑制。同時,PTH促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,影響腫瘤分化,加速腫瘤轉(zhuǎn)移和惡化；PTH還能促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞干細(xì)胞的形成,對卵巢癌干細(xì)胞干性有重要影響。因此調(diào)節(jié)PTH在體內(nèi)的含量,找到PTH對卵巢癌作用的具體靶點(diǎn)和通路,并探尋對這些重要靶點(diǎn)起調(diào)控作用的純天然藥物,例如中藥等,將為治療卵巢癌提供新的思路,為攻克卵巢癌找到新的突破口。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌 甲狀旁腺激素 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 腫瘤干細(xì)胞 增殖
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 縮略詞8-10
• 上篇：甲狀旁腺激素對卵巢癌的作用及卵巢癌與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和干細(xì)胞干性的作用進(jìn)展研究10-23
• 綜述一：綜述一甲狀旁腺激素生理病理作用的研究進(jìn)展10-17
• 參考文獻(xiàn)14-17
• 綜述二：卵巢癌與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及腫瘤干細(xì)胞干性的相關(guān)研究17-23
• 參考文獻(xiàn)21-23
• 下篇 實(shí)驗(yàn)研究部分23-56
• 前言23-24
• 實(shí)驗(yàn)一 PTH對卵巢癌細(xì)胞增殖、調(diào)亡、遷移、侵襲的作用及機(jī)制研究24-40
• 1 實(shí)檢材料與試劑24-28
• 2 實(shí)驗(yàn)方法28-33
• 結(jié)果33-39
• 討論39-40
• 實(shí)驗(yàn)二：PTH對卵巢癌EMT現(xiàn)象的影響40-48
• 1實(shí)驗(yàn)材料與試劑40-41
• 2 實(shí)驗(yàn)方法41-44
• 結(jié)果44-47
• 討論47-48
• 實(shí)驗(yàn)三：PTH對卵巢癌細(xì)胞干細(xì)胞干性的作用48-56
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑49
• 2 實(shí)驗(yàn)方法49-52
• 結(jié)果52-56
• 討論56
• 結(jié)論56-58
• 參考文獻(xiàn)58-59
• 致謝59-60
• 個人簡歷60-61
• 附錄A 常用儀器一覽表61

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