本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)NIBP基因沉默對人結(jié)腸癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響

  更多相關(guān)文章： 結(jié)腸 核轉(zhuǎn)錄因子-κB誘導(dǎo)激酶和IκB激酶連接蛋白 腫瘤壞死因子-α 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化 慢病毒

【摘要】：目的 通過研究慢病毒介導(dǎo)的核轉(zhuǎn)錄因子-κB誘導(dǎo)激酶和IκB激酶連接蛋白(NIK and IKKβ binding protein, NIBP)基因沉默后對人結(jié)腸癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的影響,初步探討NIBP與結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系,以及可能涉及的機(jī)制。方法 利用DNA重組技術(shù),進(jìn)行設(shè)計并構(gòu)建人NIBP基因的Lenti-EGFP-NIBP-miR慢病毒載體,以及無關(guān)序列的Lenti-EGFP慢病毒載體感染人結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞株,并用殺稻瘟菌素(blasticidin, BSD)進(jìn)行篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染低表達(dá)NIBP的單克隆HCT116細(xì)胞,分別為轉(zhuǎn)染組(NIBP-RNAi組)和陰性對照組(NC組),而未予轉(zhuǎn)染處理的HCT116細(xì)胞則為空白對照組(CON組)。將實(shí)驗分為非TNF-α組和TNF-α組兩大組,非TNF-α組包括轉(zhuǎn)染組(NIBP-RNAi) 、陰性對照組(NC)、空白對照組(CON), TNF-α組包括轉(zhuǎn)染組+TNF-α(NIBP-RNAi+) 、陰性對照組+TNF-α(NC+)、空白對照組+TNF-α(CON+),根據(jù)文獻(xiàn)及本課題組先前的實(shí)驗結(jié)果,TNF-α組均予終濃度為20 ng/ml的NF-κB活化激活劑TNF-α進(jìn)行干預(yù)。應(yīng)用實(shí)時熒光定量-PCR及Western Blot技術(shù)檢測非TNF-α組NIBP mRNA及蛋白的表達(dá)情況以及各組細(xì)胞中E-cadherin與N-cadherin的表達(dá)；采用倒置相差顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)的變化。結(jié)果 倒置熒光顯微鏡下可見NIBP-RNAi組及NC組有大量的綠色熒光蛋白。實(shí)時熒光定量-PCR及Western Blot均顯示NIBP-RNAi組NIBP的表達(dá)均顯著低于NC組及CON組(P0.05)。實(shí)時熒光定量-PCR結(jié)果顯示,各組E-cadherin mRNA的相對表達(dá)量為：NIBP-RNAi組(8.12±0.50)和NIBP-RNAi+組(4.11±1.65)均高于CON組(1.00±0.00)和NC組(1.04±0.05)(P0.05),而CON+組(0.30±0.13)和NC+組(0.32±0.10)則明顯低于CON組和NC組(P0.05)；各組N-cadherin mRNA的相對表達(dá)量為：NIBP-RNAi組(0.18±0.08)和NIBP-RNAi+組(0.48±0.18)均低于CON組(1.00±0.00)和NC組(0.94±0.03)(P0.05),CON+組(6.55±2.31)和NC+組(7.26±2.20)均高于CON組和NC組(P0.05)。 Western Blot結(jié)果顯示,各組的E-cadherin的蛋白表達(dá)量分別是：NIBP-RNAi組(1.30±0.11)和NIBP-RNAi+組(0.64±0.01)高于CON組(0.37±0.01)和NC組(0.34±0.02)(P0.05),CON+組(0.18±0.02)和NC+組(0.18±0.01)均低于CON組和NC組(P0.05);各組的N-cadherin的蛋白表達(dá)量為：NIBP-RNAi組(0.18±0.06)和NIBP-RNAi+組(0.34±0.01)均低于CON組(0.56±0.05)和NC組(0.47±0.13)(P0.05),而CON+組(0.67±0.06)和NC+組(0.68±0.03)均高于CON組和NC組(P0.05)。綜上可知,與CON組比較,CON+組、NC+組細(xì)胞的E-cadherin的mRNA和蛋白的表達(dá)均明顯降低、N-cadherin的mRNA和蛋白的表達(dá)均明顯上升(P0.05), NIBP-RNAi組及IBP-RNAi+組細(xì)胞的E-cadherin的mRNA和蛋白的表達(dá)均明顯上升、N-cadherin的mRNA和蛋白的表達(dá)均明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；而CON組和NC組比較,以及CON+組和NC+組比較,E-cadherin、N-cadherin的mRNA和蛋白的表達(dá)差異均無統(tǒng)計意義(P0.05)。經(jīng)倒置相差顯微鏡可觀察到CON+組、NC+組的細(xì)胞較CON組和NC組的細(xì)胞而言明顯發(fā)生EMT變化,表現(xiàn)為細(xì)胞細(xì)長的絲狀偽足增多,細(xì)胞間排列更疏松；NIBP-RNAi組的細(xì)胞則由間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)樯掀ぜ?xì)胞形態(tài),可見較多的多角形或圓形細(xì)胞,偽足明顯減少,細(xì)胞連接緊密。結(jié)論靶向下調(diào)NIBP基因的表達(dá)可抑制人結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞EMT的發(fā)生,這可能與NF-κB經(jīng)典途徑的激活受抑制有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)腸 核轉(zhuǎn)錄因子-κB誘導(dǎo)激酶和IκB激酶連接蛋白 腫瘤壞死因子-α 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化 慢病毒
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.35
【目錄】：

• 個人簡歷3-5
• 中英文縮略詞對照表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-15
• 實(shí)驗技術(shù)路線圖15-16
• 材料與方法16-38
• 結(jié)果38-47
• 討論47-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-64
• 綜述64-78
• 參考文獻(xiàn)71-78
• 致謝78-80
• 攻讀學(xué)位期間以第一作者參與發(fā)表的學(xué)術(shù)論文80

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周建平,劉祺;生長激素對人結(jié)腸癌細(xì)胞作用的研究[J];中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2005年04期

2 馬杉姍;王世平;連正興;韓紅兵;劉慧;;藏靈菇嗜熱鏈球菌胞外多糖對人結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖抑制[J];食品科學(xué);2008年04期

3 宮金伶;黃川;宋德志;姜艷華;賴振屏;高靈茜;王立芳;劉金穎;潘文寶勝;樊曉暉;;新城疫病毒7793株對人結(jié)腸癌細(xì)胞的殺傷作用[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2011年03期

4 徐秋玲;金秀東;郭冉;張緒東;劉桂蓮;;五味子乙素逆轉(zhuǎn)人結(jié)腸癌細(xì)胞多藥耐藥性[J];中國食物與營養(yǎng);2011年12期

5 曲嫻;陳杰;;表皮生長因子受體反義寡聚核苷酸抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖[J];世界華人消化雜志;2006年35期

6 彭秋平;梁后杰;周琪;周進(jìn)明;傅曉嵐;鐘大平;;己糖激酶-Ⅱ基因在人結(jié)腸癌細(xì)胞中的表達(dá)及其治療意義[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2007年15期

7 韓曉紅;邵世和;許化溪;薛延軍;劉嫣芳;鄧一脈;陳衛(wèi)偉;曹娟;;亞硒酸鈉對人結(jié)腸癌細(xì)胞的抑制機(jī)制[J];江蘇大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2008年06期

8 劉民培,田慶生,郭玉書,馬世英,董寶印,芐非非,王笑利;分泌抗人結(jié)腸癌細(xì)胞單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞系的建立[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1985年02期

9 李建人,趙彼得,羅沈如,馬愛敏;高熱合并化療放療對人結(jié)腸癌細(xì)胞的作用[J];中華理療雜志;1995年03期

10 杜培革,董俊紅,王振明,安麗萍,傅桂蓮;反義人端粒酶催化亞單位基因轉(zhuǎn)染對人結(jié)腸癌細(xì)胞惡性表型的逆轉(zhuǎn)作用[J];北華大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2005年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 伍煥杰;黃海濤;李倩;張敏;劉莉;梅其炳;;改構(gòu)蘋果多糖對人結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲能力的影響[A];中國藥理學(xué)會第十次全國學(xué)術(shù)會議專刊[C];2009年

2 馮海涼;楊麗娟;卞曉翠;楊振麗;顧蓓;張宏;王春景;蘇小玲;趙曉梅;劉玉琴;;CD133在人結(jié)腸癌細(xì)胞分化中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

3 吳嫣爽;王嘉悅;周曉囡;李君;雷蕾;;人結(jié)腸癌細(xì)胞來源的誘導(dǎo)多能癌(iPC)細(xì)胞的建立[A];中國解剖學(xué)會2013年年會論文文摘匯編[C];2013年

4 楊毅;劉洪隱;毛慧生;王立梅;;應(yīng)用C-myc反義RNA轉(zhuǎn)錄體對人結(jié)腸癌細(xì)胞惡性表型的逆轉(zhuǎn)研究[A];2000全國腫瘤學(xué)術(shù)大會論文集[C];2000年

5 鄧景岳;楊美華;畢明剛;;新化合物JR6對人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29體外抑瘤機(jī)制研究[A];中國藥理學(xué)會第十次全國學(xué)術(shù)會議�？痆C];2009年

6 陸嶸;房靜遠(yuǎn);王霞;孫丹鳳;李恩靈;朱紅音;;RNAi阻斷人結(jié)腸癌細(xì)胞ERK-MAPK信號傳導(dǎo)通路調(diào)控細(xì)胞周期的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國消化病學(xué)術(shù)會議論文匯編（下冊）[C];2007年

7 金海峰;呂賓;陳U，

本文編號：987804