本文關鍵詞：影響硫氧還蛋白亞細胞定位的甘草有效組分研究

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【摘要】：當前國家社會快速進步,百姓生活消費實力也在穩(wěn)步提升。然而由于發(fā)展所帶來的一系列污染問題以及人們長期養(yǎng)成的不良生活習慣等方面,都可能會導致人體內(nèi)部正常的細胞周期發(fā)生紊亂,進而會使細胞生理功能等方面出現(xiàn)嚴重失調(diào),最終惡化演變?yōu)椤鞍┌Y”。硫氧還蛋白(Thioredoxin-1,Trx)屬于分布比較寬泛的小分子多功能蛋白,其在進化上比較保守且同屬氧化還原類蛋白家族。目前對多種腫瘤細胞系的研究顯示,Trx表達水平與腫瘤細胞耐藥性之間存在正比例關系;與此同時,相關臨床探索也證實了Trx表達水平較高的癌癥病人更容易對多種化療藥物產(chǎn)生顯著抗藥性。這主要是由于化療藥物可刺激Trx入核使其保持還原狀態(tài),進而通過增強相關轉錄因子的活性使腫瘤細胞具有抵抗凋亡繼而抗藥的能力。因此將Trx作為一個潛在抗癌治療靶點具有非常重要的價值意義。中醫(yī)在我國的發(fā)展歷史悠久,由于其來源豐富且毒副作用小,因此廣受病患青睞。所以探尋有效抗癌天然藥物的任務也十分緊迫。本論文主要通過采用甘草天然混合組分及其主要單藥活性成分作用于人宮頸癌HeLa細胞,從而使用相關方法與手段對Trx在亞細胞中的定位作用進行了一系列探究。首先,采用復方甘草片(其內(nèi)主要成分為甘草浸膏)作為實驗藥物設置相同藥物濃度不同作用時間實驗組和相同作用時間不同藥物濃度實驗組。Western blot結果顯示兩組中,Trx在其細胞核與細胞漿內(nèi)的表達變化均隨著藥物濃度的增大和作用時間的延長呈現(xiàn)下降趨勢。因此推測在甘草中存在相關有效組分,從而對Trx在亞細胞中的定位下降起到了重要作用。然后,依次采用甘草酸(皂苷類藥物)、甘草苷(黃酮類藥物)兩種主要單藥活性成分作為實驗藥物設置相同藥物濃度不同作用時間實驗組和相同作用時間不同藥物濃度實驗組。Western blot結果發(fā)現(xiàn)兩組中,Trx在其細胞核與細胞漿的定位表達均伴隨著藥物濃度增大與作用時間延長呈下降趨勢。因此證明了這兩種單藥活性成分對于Trx在亞細胞中的定位下降起到了重要作用,它們即為甘草中能夠抑制Trx入核的有效組分。與此同時,再將三七皂苷R1(皂苷類藥物)和蕓香葉苷(黃酮類藥物)兩種佐證藥物按照上述實驗設置作用HeLa細胞,Western blot結果發(fā)現(xiàn)二者對Trx在亞細胞中的含量變化無明顯作用。因此說明了甘草酸、甘草苷對于Trx在亞細胞中的定位下降是非常有效的。最后,再將甘草酸、甘草苷兩種單藥分別與抗癌藥物順鉑、紫杉醇、表柔比星進行“兩兩聯(lián)合”設置藥物實驗組。Western blot及四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法結果表明甘草對細胞毒性較弱,且當使用的化療藥物保持低劑量濃度時,隨著甘草酸/甘草苷藥物濃度增加,Trx在其細胞核、細胞漿中的表達均呈逐漸下降趨勢;與此同時,兩種單藥和低劑量化療藥物聯(lián)合應用對細胞的生長抑制情況可與單純高劑量化療藥物作用效果相似。因此通過聯(lián)合用藥有望降低化療藥物使用劑量,從而在提升癌癥治療效果及減輕對患者的毒副作用方面顯示出了一定的潛在臨床意義。
【關鍵詞】：甘草 硫氧還蛋白 亞細胞定位 有效組分 表達
【學位授予單位】：武漢工程大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R73-36
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-13
• 第1章 文獻綜述13-34
• 1.1 前言13-14
• 1.2 腫瘤細胞14-17
• 1.2.1 腫瘤細胞的特點14-16
• 1.2.2 腫瘤細胞形成的原因與過程16-17
• 1.3 硫氧還蛋白簡介17-24
• 1.3.1 硫氧還蛋白研究進展17-19
• 1.3.2 硫氧還蛋白結構特點19-20
• 1.3.3 硫氧還蛋白生物活性20-22
• 1.3.4 硫氧還蛋白與各種疾病22-24
• 1.4 硫氧還蛋白系統(tǒng)與腫瘤之間關系24-27
• 1.4.1 硫氧還蛋白在腫瘤機理方面研究24-26
• 1.4.2 硫氧還蛋白與腫瘤治療26-27
• 1.5 相應天然藥物概述27-33
• 1.5.1 甘草的化學成分27-28
• 1.5.2 甘草酸/甘草苷相關作用28-31
• 1.5.3 三七皂苷R131-32
• 1.5.4 蕓香葉苷32-33
• 1.6 本課題研究目的與意義33-34
• 第2章 實驗材料與方法34-44
• 2.1 實驗材料34-37
• 2.1.1 細胞及培養(yǎng)基34
• 2.1.2 主要試劑34-35
• 2.1.3 主要儀器設備35
• 2.1.4 主要溶液配制35-37
• 2.2 實驗方法37-44
• 2.2.1 細胞操作方法37-39
• 2.2.2 實驗分組方法39-40
• 2.2.3 細胞漿蛋白與細胞核蛋白抽提方法40-41
• 2.2.4 BCA蛋白濃度測定方法41-42
• 2.2.5 SDS-PAGE電泳方法42
• 2.2.6 Western blot檢測方法42-43
• 2.2.7 MTT檢測方法43-44
• 第3章 結果與分析44-59
• 3.1 Western blot檢測實驗組結果分析44-56
• 3.1.1 復方甘草片對硫氧還蛋白亞細胞定位的影響44-45
• 3.1.2 GCA/LQ對硫氧還蛋白亞細胞定位的影響45-48
• 3.1.3 三七皂苷R1對硫氧還蛋白亞細胞定位的影響48-49
• 3.1.4 蕓香葉苷對硫氧還蛋白亞細胞定位的影響49-51
• 3.1.5 聯(lián)合用藥對硫氧還蛋白亞細胞定位的影響51-56
• 3.2 MTT比色法檢測實驗組結果分析56-59
• 第4章 結論與建議59-61
• 4.1 結論59-60
• 4.2 建議60-61
• 參考文獻61-67
• 攻讀碩士期間已發(fā)表的論文67-68
• 致謝68

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