發(fā)布時(shí)間：2017-10-05 22:05

  本文關(guān)鍵詞：CTA抗原FBXO39在腫瘤細(xì)胞中的生物學(xué)功能探討

  更多相關(guān)文章： FBXO39 CT抗原 組織表達(dá)譜 DNA損傷 腫瘤代謝

【摘要】：腫瘤-睪丸抗原(Cancer-testis antigen, CTA)是一類具有特異性表達(dá)模式的腫瘤相關(guān)抗原,是腫瘤免疫治療中的熱門靶點(diǎn)之一。FBXO39是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的CT抗原,屬于F-box蛋白家族,具有F-box蛋白家族成員的結(jié)構(gòu)特性,但是目前與之相關(guān)的研究很少,其具體功能并不明確。已有研究表明,F-box蛋白家族成員在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要的角色,參與了細(xì)胞周期調(diào)控、DNA損傷修復(fù)、代謝調(diào)控等生命活動(dòng)或生化過程。我們推測(cè),FBXO39作為F-box蛋白家族的一員,可能具有類似的作用。因此,本論文從三個(gè)方面對(duì)FBXO39在腫瘤細(xì)胞中的生物學(xué)功能進(jìn)行了初步探討：1. FBXO39在人類多器官正常組織與腫瘤及其邊緣組織中的表達(dá)譜分析利用組織芯片-免疫組化的方法,在人類多器官的正常組織與腫瘤及其邊緣組織中檢測(cè)了FBXO39的表達(dá)情況。發(fā)現(xiàn)在腫瘤及其邊緣組織中FBXO39的表達(dá)量普遍高于正常組織,而且與腫瘤的惡化程度呈正相關(guān),提示FBXO39可能發(fā)揮原癌蛋白的功能。2.FBXO39在腫瘤細(xì)胞中的生物學(xué)效應(yīng)分析在成功構(gòu)建FBXO39真核表達(dá)載體的基礎(chǔ)上,通過基因轉(zhuǎn)染、MTT、流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)FBXO39的過表達(dá)對(duì)MCF7細(xì)胞的存活、凋亡與細(xì)胞周期的影響不明顯。與此同時(shí),通過生物信息學(xué)的方法分析,發(fā)現(xiàn)FBXO39基因核心啟動(dòng)子區(qū)域具有多個(gè)與DNA損傷相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),推測(cè)其可能參與DNA損傷應(yīng)答。在此基礎(chǔ)上,采用UV-C誘導(dǎo)的MCF7細(xì)胞DNA損傷模型,通過定量PCR和Western blot的方法,我們證實(shí)了FBXO39在UV-C誘導(dǎo)的DNA損傷條件下表達(dá)上調(diào),表明其參與了腫瘤細(xì)胞對(duì)DNA損傷應(yīng)答的過程。3. FBXO39基因?qū)δ[瘤細(xì)胞代謝分子的影響利用代謝組PCR array的方法,在MCF7細(xì)胞中篩選出了受FBXO39基因調(diào)控的代謝相關(guān)基因,并在Ntera2細(xì)胞中進(jìn)行了進(jìn)一步的確認(rèn)。最終發(fā)現(xiàn),ACDH9A1、MCT1、 DLAT、HMGCS、FASN、GLUL基因能夠在FBXO39的作用下表達(dá)上調(diào)。綜上,我們發(fā)現(xiàn)FBXO39基因在人類腫瘤組織的表達(dá)要高于正常組織,具有原癌基因的特點(diǎn),并可能參與腫瘤細(xì)胞對(duì)DNA損傷的響應(yīng)和代謝調(diào)節(jié)。本研究對(duì)深入探索FBXO39在腫瘤中的功能具有積極意義。
【關(guān)鍵詞】：FBXO39 CT抗原 組織表達(dá)譜 DNA損傷 腫瘤代謝
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R73-3
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-12
• 主要縮略詞表12-14
• 第1章 緒論14-30
• 1.1 CT抗原14-16
• 1.1.1 CT抗原的分類14
• 1.1.2 CT抗原的表達(dá)特點(diǎn)14-15
• 1.1.3 CT抗原與腫瘤15-16
• 1.2 F-box蛋白家族簡(jiǎn)介16-24
• 1.2.1 F-box蛋白的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)16-18
• 1.2.2 F-box蛋白的功能18-20
• 1.2.3 F-box蛋白調(diào)節(jié)的信號(hào)通路20
• 1.2.4 F-box蛋白家族在腫瘤中的功能分類20-24
• 1.3 F-box蛋白與DNA損傷24-26
• 1.3.1 DNA損傷與腫瘤發(fā)生24-25
• 1.3.2 F-box蛋白與DNA損傷25-26
• 1.4 F-box蛋白與腫瘤細(xì)胞代謝26-27
• 1.4.1 腫瘤細(xì)胞的代謝特點(diǎn)26
• 1.4.2 與腫瘤細(xì)胞代謝相關(guān)的F-box蛋白26-27
• 1.5 FBXO39基因的簡(jiǎn)介27
• 1.6 論文研究思路27-30
• 第2章 FBXO39在多種正常組織與腫瘤組織中的組織表達(dá)譜分析30-40
• 2.1 前言30
• 2.2 材料與方法30-32
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器30-31
• 2.2.2 材料與試劑31
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)方法31-32
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論32-38
• 2.3.1 FBXO39在多種器官正常組織和腫瘤組織中的表達(dá)情況32-35
• 2.3.2 比較FBXO39在正常組織和腫瘤組織中的表達(dá)情況35-38
• 2.4 小結(jié)38-40
• 第3章 FBXO39在腫瘤細(xì)胞中的生物學(xué)效應(yīng)分析40-59
• 3.1 前言40
• 3.2 材料與方法40-52
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器40-41
• 3.2.2 材料與試劑41-42
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)方法42-52
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論52-58
• 3.3.1 外源表達(dá)FBXO39對(duì)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響52-55
• 3.3.2 生物信息學(xué)對(duì)FBXO39的啟動(dòng)子區(qū)域的分析55-56
• 3.3.3 FBXO39對(duì)UV-C誘導(dǎo)的DNA損傷信號(hào)的響應(yīng)56-58
• 3.4 小結(jié)58-59
• 第4章 FBXO39對(duì)腫瘤細(xì)胞代謝分子的影響59-66
• 4.1 前言59
• 4.2 材料與方法59-61
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器59-60
• 4.2.2 材料與試劑60
• 4.2.3 實(shí)驗(yàn)方法60-61
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論61-65
• 4.3.1 外源FBXO39在MCF7、Ntera2細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)61-62
• 4.3.2 PCR array方法篩選MCF7中受FBXO39調(diào)節(jié)的代謝基因62-64
• 4.3.3 在Ntera2細(xì)胞中驗(yàn)證受FBXO39調(diào)節(jié)的代謝基因64-65
• 4.4 小結(jié)65-66
• 結(jié)論66-67
• 參考文獻(xiàn)67-77
• 附錄A 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文77-78
• 致謝78

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本文編號(hào)：979066