本文關(guān)鍵詞：EIF3D對腎細(xì)胞癌惡性增殖的調(diào)控機制研究

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【摘要】：一、研究背景腎細(xì)胞癌(renal cell carcinoma)是腎惡性腫瘤中最常見腫瘤類型,占泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的第三位。隨著腹部影像檢查的普及,越來越多的局限性早期腎癌被發(fā)現(xiàn),但仍有一部分腎癌發(fā)現(xiàn)時已處于晚期階段。目前,腎癌根治術(shù)是局限性早期腎癌治療的金標(biāo)準(zhǔn)。然而術(shù)后仍有部分患者出現(xiàn)腫瘤的復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,其潛在的機制仍未知。盡管近年來的分子生物和靶向VEGFR治療的發(fā)展給晚期進展性腎細(xì)胞癌帶來了希望,但是大約有50%的患者對靶向治療不敏感,或者有大部分患者在服藥后1年左右對靶向藥物產(chǎn)生耐受。因此探索腎細(xì)胞癌治療的新靶點,增加對腎細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的潛在分子機制的認(rèn)識,進而為臨床腎細(xì)胞癌的早期診斷及預(yù)后提供依據(jù),已成為泌尿外科的重要研究熱點。EIF3D是翻譯起始因子的主要成員。作為一個相對較新的分子,目前研究報道較少,且大多僅限于腫瘤表型的研究。研究表明,EIF3D與惡性腫瘤細(xì)胞的抗凋亡相關(guān),敲除EIF3D基因能夠抑制間皮瘤細(xì)胞的惡性增殖。通過丁型肝炎病毒感染HEK-293細(xì)胞后檢測蛋白質(zhì)組的變化,發(fā)現(xiàn)EIF3D表達上調(diào),指出EIF3D與肝癌的發(fā)生有關(guān)。也有報道表明EIF3D和腸癌、黑色素瘤以及膠質(zhì)瘤的惡性增殖有關(guān),但尚未對其下游機制進行深入探討。在腎細(xì)胞癌中,EIF3D的功能作用尚未闡明。為了進一步闡釋EIF3D在腎細(xì)胞癌惡性增殖的作用機制,我們采用基因數(shù)據(jù)庫、配對新鮮腎細(xì)胞癌組織、腎細(xì)胞癌組織微陣列檢測EIF3D在腎細(xì)胞癌組織中的mRNA和蛋白表達水平。隨后應(yīng)用慢病毒介導(dǎo)敲減模型在腎細(xì)胞癌細(xì)胞株中沉默EIF3D后,進行一系列腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性及其下游機制的研究。二、目的探索EIF3D在腎細(xì)胞癌組織中表達水平和對腎細(xì)胞癌細(xì)胞的生物學(xué)特性影響及其分子機制。三、方法(一)在腎細(xì)胞癌新鮮組織、腎細(xì)胞癌組織切片及基因數(shù)據(jù)庫中檢測EIF3D的mRNA和蛋白的表達水平。于2015年1月至2015年6月在上海長征醫(yī)院泌尿外科收集20對新鮮組織腎細(xì)胞癌組織標(biāo)本。所有標(biāo)本通過兩種途徑保存:1、制成免疫組化檢測玻片;2、新鮮組織液氮保存。102例腎細(xì)胞癌患者組織微陣列芯片由上海市長海醫(yī)院泌尿外科贈送。以上組織標(biāo)本通過免疫組化和蛋白印跡法(Western Blot)檢測EIF3D的蛋白表達水平,并分析與臨床指標(biāo)的相關(guān)性。應(yīng)用ONCOMINE基因數(shù)據(jù)庫分析EIF3D在腎細(xì)胞癌的mRNA表達水平及與臨床指標(biāo)的相關(guān)性。(二)、構(gòu)建沉默EIF3D慢病毒載體和刷選穩(wěn)定沉默EIF3D的腎細(xì)胞癌細(xì)胞株設(shè)計靶向EIF3D的sh RNA序列,插入含綠色熒光報告基因(GFP)的質(zhì)粒中,構(gòu)建穩(wěn)定沉默EIF3D的慢病毒載體。應(yīng)用蛋白免疫印跡方法檢測6種腎細(xì)胞癌細(xì)胞株中EIF3D的表達水平,挑選2株高表達EIF3D細(xì)胞株作為穩(wěn)定沉默EIF3D的候選細(xì)胞株。將已重組的沉默EIF3D的慢病毒感染這2株腎細(xì)胞癌細(xì)胞,通過綠色熒光表達情況判斷感染效率,利用Real-time PCR和Western Blot檢測EIF3D的敲減效率。(三)、檢測穩(wěn)定沉默EIF3D腎細(xì)胞癌細(xì)胞株的細(xì)胞增殖和細(xì)胞克隆的腫瘤生物學(xué)特征的改變情況在穩(wěn)定沉默EIF3D的腎細(xì)胞癌細(xì)胞株的基礎(chǔ)上,采用MTT實驗和克隆形成實驗,檢測穩(wěn)定沉默EIF3D細(xì)胞株的細(xì)胞增殖情況和單細(xì)胞克隆形成情況。(四)、探索沉默EIF3D后影響腎細(xì)胞癌細(xì)胞惡性增殖的分子機制利用流式細(xì)胞分選技術(shù)檢測定沉默EIF3D的腎細(xì)胞癌細(xì)胞株的細(xì)胞周期分布情況,進行統(tǒng)計分析。再通過Western Blot檢測和ONCOMINE基因數(shù)據(jù)庫分析影響細(xì)胞周期分布的調(diào)控分子,闡釋其分子機制。四、結(jié)果(一)在腎細(xì)胞癌組織中EIF3D的蛋白表達水平上調(diào)通過蛋白免疫印跡方法檢測新鮮腎細(xì)胞癌與配對癌旁組織,發(fā)現(xiàn)腎細(xì)胞癌中EIF3D蛋白表達水平顯著上調(diào)(P=0.005)。免疫組化染色發(fā)現(xiàn),腎細(xì)胞癌組織標(biāo)本染色較癌旁組織明顯加深,且陽性細(xì)胞數(shù)目增多,存在顯著差異(P0.001)。(二)EIF3D的表達水平與腎細(xì)胞癌患者的臨床特征成正相關(guān)腎細(xì)胞癌組織微陣列芯片檢測發(fā)現(xiàn)EIF3D表達水平與腫瘤大小(P=0.004)和TNM分期(P=0.03)呈顯著地正相關(guān),且隨著EIF3D染色密度加深,TNM分期不斷增加。(三)利用ONCOMINE微陣列芯片數(shù)據(jù)庫進行EIF3D在腎細(xì)胞癌與正常腎組織的mRNA表達水平的薈萃分析對5個腎細(xì)胞癌基因芯片數(shù)據(jù)庫進行薈萃分析,EIF3D的mRNA表達水平在腎透明細(xì)胞癌中較正常腎組織顯著上調(diào)(P=0.004)。通過對腎細(xì)胞癌亞型分析發(fā)現(xiàn),惡性程度較高的腎透明細(xì)胞癌(CCRCC)和腎乳頭狀細(xì)胞癌(PRCC)的EIF3D表達水平較惡性程度較低腎嫌色細(xì)胞癌(CRCC)上調(diào)(P=0.002;P=0.010)。(四)在腎細(xì)胞癌細(xì)胞株中通過慢病毒介導(dǎo)穩(wěn)定敲減EIF3D基因Western Blot檢測腎細(xì)胞癌細(xì)胞株,786-O和ACHN細(xì)胞株的EIF3D表達水平較其他細(xì)胞株上調(diào)。786-O和ACHN細(xì)胞株感染慢病毒介導(dǎo)的sh RNA沉默EIF3D,Real-time PCR和Western Blot驗證敲減效率,穩(wěn)定沉默EIF3D細(xì)胞株模型成功建立。(五)EIF3D沉默顯著抑制腎細(xì)胞癌細(xì)胞的增殖和克隆形成能力786-O和ACHN細(xì)胞在沉默EIF3D后,細(xì)胞生長曲線顯著抑制較對照組(P0.001)�？寺〈笮≡诔聊M和對照組顯著存在差異,且沉默組的克隆數(shù)量顯著少于對照組(786-O:P=0.0002;ACHN:P0.0000)。(六)EIF3D沉默誘導(dǎo)腎細(xì)胞癌細(xì)胞G2/M期阻滯786-O和ACHN細(xì)胞在沉默EIF3D后,利用流式細(xì)胞分選技術(shù)發(fā)現(xiàn)EIF3D沉默組G2/M期細(xì)胞較對照組顯著上調(diào),同時sub-G1期的細(xì)胞累積。為了驗證G2/M期阻滯的相關(guān)分子機制,Western Blot檢測周期相關(guān)下游分子。結(jié)果發(fā)現(xiàn)沉默組周期相關(guān)蛋白CDK1和Cyclin B1蛋白表達水平下調(diào),凋亡相關(guān)蛋白p21和RARP裂解產(chǎn)物上調(diào)。通過ONCOMINE基因數(shù)據(jù)庫分析,EIF3D的表達水平與Cyclin B1(r2=0.2354,P0.0001)and CDK1(r2=0.1332,P=0.0003)呈現(xiàn)正相關(guān),同時與增殖相關(guān)分子標(biāo)志物PCNA(r2=0.1687,P0.0001)呈現(xiàn)正相關(guān)。五、結(jié)論1、EIF3D在腎細(xì)胞癌組織中顯著上調(diào),且與TNM分期呈正相關(guān)。2、EIF3D沉默誘導(dǎo)腎細(xì)胞癌細(xì)胞G2/M期阻滯通過下調(diào)Cyclin B1/CDK1信號通路,進而顯著抑制腎細(xì)胞癌細(xì)胞的惡性增殖能力3、EIF3D作為一個有潛力的促腫瘤分子在腎細(xì)胞癌的發(fā)生進展起著至關(guān)重要的作用。
【關(guān)鍵詞】：EIF3D 腎細(xì)胞癌 惡性增殖
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 摘要6-10
• Abstract10-15
• 縮略詞表15-16
• 前言16-18
• 第一部分：EIF3D在腎細(xì)胞癌組織的表達和基因數(shù)據(jù)庫分析18-33
• 一、材料和方法18-24
• (一) 臨床資料及標(biāo)本收集18-20
• (二) 標(biāo)本檢測20-24
• 二、實驗結(jié)果24-33
• (一) 腎細(xì)胞癌組織中EIF3D蛋白表達水平呈現(xiàn)高表達趨勢24-25
• (二) 免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)腎細(xì)胞癌組織標(biāo)本中EIF3D過表達25-26
• (三) EIF3D的表達水平與腫瘤TNM分期及腫瘤大小相關(guān)26-28
• (四) 在腎細(xì)胞癌組織EIF3D mRNA表達水平的薈萃分析通過ONCOMINE基因數(shù)據(jù)庫28-30
• (五) EIF3D表達水平腎細(xì)胞亞型的惡性程度呈正相關(guān)通過ONCOMINE基因數(shù)據(jù)庫分析30-33
• 第二部分：腎細(xì)胞癌細(xì)胞株敲減EIF3D模型構(gòu)建及其效率驗證33-44
• 一、材料和方法33-41
• (一) 實驗材料33-34
• (二) 實驗方法34-41
• 二、實驗結(jié)果41-44
• (一) 挑選高表達EIF3D的腎細(xì)胞癌細(xì)胞株41
• (二) 驗證786-O和ACHN腎細(xì)胞癌細(xì)胞的感染效率41-42
• (三) 驗證786-O和ACHN腎細(xì)胞癌細(xì)胞的敲減效率42-44
• 第三部分：腎細(xì)胞癌細(xì)胞敲減EIF3D后細(xì)胞功能表型的改變情況44-52
• 一、材料和方法44-47
• (一) 實驗材料44-45
• (二) 實驗方法45-47
• 二、實驗結(jié)果47-52
• (一) 腎細(xì)胞癌細(xì)胞敲減EIF3D后抑制細(xì)胞的增殖能力47
• (二) 腎細(xì)胞癌細(xì)胞敲減EIF3D后抑制細(xì)胞克隆形成能力47-48
• (三) 腎細(xì)胞癌細(xì)胞敲減EIF3D后誘導(dǎo)細(xì)胞周期G2/M期阻滯48-50
• (四) 腎細(xì)胞癌細(xì)胞敲減EIF3D后下調(diào)周期相關(guān)蛋白CDK1和Cyclin B1的表達水平和上調(diào)凋亡相關(guān)蛋白p21和RARP裂解產(chǎn)物的表達水平50-51
• (五) ONCOMINE數(shù)據(jù)庫相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)腎細(xì)胞癌組織樣品中EIF3D的表達水平與周期相關(guān)蛋白CDK1和Cyclin B1和增殖相關(guān)蛋白PCNA呈正相關(guān)51-52
• 討論52-53
• 結(jié)論53-54
• 后續(xù)的進一步研究54
• References54-58
• 綜述 翻譯調(diào)控因子eIF3在腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用58-69
• References63-69
• 碩士期間發(fā)表論文和參加科研工作情況69-72
• 已發(fā)表論文首頁（部分）72-82
• 致謝82

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1 段建敏,李智,秦大山,陳一戎;腎細(xì)胞癌患者血清中血管內(nèi)皮生長因子的表達[J];蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2000年04期

2 袁建峰;腫瘤相關(guān)胰蛋白酶抑制因子作為腎細(xì)胞癌預(yù)后的一個因素[J];中華泌尿外科雜志;2001年08期

3 段建敏,李智,秦大山,史庭凱,董馳;血管內(nèi)皮生長因子在腎細(xì)胞癌中的表達意義[J];中華泌尿外科雜志;2001年10期

4 李華,李玲;腎細(xì)胞癌的超聲診斷[J];中國超聲診斷雜志;2002年08期

5 卓棟,姜書傳,韓杰,程慶水;腎細(xì)胞癌尿激酶型纖溶酶原激活物表達的研究[J];皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2002年04期

6 孫正船,曲延剛;腎細(xì)胞癌舌轉(zhuǎn)移1例[J];診斷病理學(xué)雜志;2002年05期

7 張秀華,李光明,郭素霞;P~(16)在腎細(xì)胞癌癌組織中表達的臨床意義探討[J];山東醫(yī)藥;2003年20期

8 王金根,張元芳,丁強,陳波,金建軍,王忠;血管內(nèi)皮生長因子在腎細(xì)胞癌的表達及臨床意義[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2003年05期

9 彭作鋒,張功亮,王建,秦文,宋樂明,蔣叔凱;幼兒腎細(xì)胞癌一例報告[J];中華泌尿外科雜志;2004年02期

10 魏建平,杜聯(lián)芳,邢晉放,蘇一巾;腎細(xì)胞癌超聲表現(xiàn)分析[J];中國超聲診斷雜志;2005年09期

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1 張進;董柏君;陳勇輝;陳奇;陳海戈;薛蔚;周立新;劉東明;黃翼然;;7cm以內(nèi)腎細(xì)胞癌腫瘤大小與臨床病理相關(guān)性研究[A];第十六屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

2 任曉蘇;毛澤慶;汝曉睿;史文生;張常青;;腎細(xì)胞癌的多層螺旋CT診斷[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三屆全國放射學(xué)大會論文匯編（下冊）[C];2006年

3 劉躍新;畢維棋;陳山;張光銀;喬廬東;鄭宇朋;王偉;張波;;多房性腎細(xì)胞癌的診斷治療[A];第六次全國中西醫(yī)結(jié)合泌尿外科學(xué)術(shù)會議暨第二屆湖南省中西醫(yī)結(jié)合泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

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6 杜傳軍;徐杰;;腎細(xì)胞癌的外科治療(附315例報告)[A];第七次中國中西醫(yī)結(jié)合泌尿外科學(xué)術(shù)年會暨第二次廣東省中西醫(yī)結(jié)合泌尿外科學(xué)術(shù)年會論文集[C];2009年

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中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 紀(jì)小龍;血管平滑肌脂肪瘤·腎細(xì)胞癌[N];衛(wèi)生與生活報;2007年

2 譯自《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》2001年12月第345卷;轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌結(jié)合治療效佳[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2001年

3 徐述湘;索拉非尼抗腎細(xì)胞癌獲FDA批準(zhǔn)[N];中國醫(yī)藥報;2006年

4 谷文;GSK公司申請將Pazopanib用于腎細(xì)胞癌治療[N];中國醫(yī)藥報;2009年

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1 黃慶波;血管內(nèi)皮特異性因子DLL4在腎細(xì)胞癌腫瘤生長，侵襲，，血管生成及血行轉(zhuǎn)移中的作用[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

2 林友成;PIK3R1基因在腎細(xì)胞癌中的功能及調(diào)控機制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

3 呂蔡;miR-495靶向SATB1基因?qū)δI細(xì)胞癌調(diào)控作用的研究[D];武漢大學(xué);2015年

4 張冰;miR-155/PI3K/AKT/FOXO3a信號通路在腎細(xì)胞癌中作用機制的研究[D];山東大學(xué);2015年

5 王新勝;MicroRNA-200a-3p靶向調(diào)控SPAG9基因?qū)δI細(xì)胞癌生物學(xué)行為的影響[D];吉林大學(xué);2016年

6 蔡冰;CMTM5對人腎癌細(xì)胞ACHN的生物學(xué)行為影響的初步研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

7 曹峗杰;CASC2在腎細(xì)胞癌中的功能和調(diào)控機制研究[D];蘇州大學(xué);2016年

8 鄭小麗;表觀遺傳藥物逆轉(zhuǎn)OCT2表達抑制和增敏腎細(xì)胞癌治療的機理研究[D];浙江大學(xué);2017年

9 柳金順;腎細(xì)胞癌差異蛋白質(zhì)發(fā)現(xiàn)與篩選的實驗研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

10 陳軍;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在腫瘤中的分布分化研究及腎細(xì)胞癌發(fā)病特點分析[D];山東大學(xué);2006年

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1 張德福;腎細(xì)胞癌的腎外臨床特點及預(yù)后多因素分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2013年

2 楊建琪;腎細(xì)胞癌中WNK2基因甲基化狀態(tài)與mRNA表達的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 朱玲;腎細(xì)胞癌靶向治療藥物的有效性和安全性評價[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

4 趙康樂;P19在腎細(xì)胞癌中表達以及Bev+Sor+Gem三線治療ⅡF及Ⅱ治療失敗的晚期腎細(xì)胞癌的研究[D];河南科技大學(xué);2015年

5 曹翔;腎細(xì)胞癌假包膜的MRI表現(xiàn)及在腫瘤剜除術(shù)中的意義[D];南京大學(xué);2014年

6 黃晉;腎癌臨床資料回顧性分析[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

7 欒雪;145例腎細(xì)胞癌患者的臨床特點及預(yù)后多因素分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

8 黃小平;腎細(xì)胞癌患者血清Ang2的表達及臨床意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

9 陳強;腹腔鏡與開放保留腎單位手術(shù)治療T1a期腎細(xì)胞癌的比較[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

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