本文關(guān)鍵詞：O-GlcNAc糖基化水解酶抑制劑聯(lián)合奧沙利鉑對(duì)膀胱癌EJ細(xì)胞增殖和凋亡的影響

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【摘要】：目的:目前,化療已經(jīng)成為肌層浸潤(rùn)性膀胱癌常見的輔助治療方法,然而,從整體來(lái)看,膀胱癌術(shù)后復(fù)發(fā)率及進(jìn)展率仍沒有得到很大的改觀,因此,如何在研究改進(jìn)手術(shù)治療膀胱癌的同時(shí),探尋更為有效的藥物化療方案具有十分重要意義。本實(shí)驗(yàn)分別將O-GlcNAc糖基化水解酶(OGA)抑制劑(Thiamet-G、THI)、奧沙利鉑(oxaliplatin、OXA)、以及二者聯(lián)合(THI+OXA)作用于膀胱癌EJ細(xì)胞,設(shè)定相應(yīng)的陰性對(duì)照組,運(yùn)用不同的實(shí)驗(yàn)方法及指標(biāo)觀察各組藥物對(duì)細(xì)胞增殖及凋亡的影響,并嘗試探討其機(jī)制,為膀胱癌化療方案的改進(jìn)提供理論基礎(chǔ)。方法:體外培養(yǎng)膀胱癌EJ細(xì)胞,并分為陰性對(duì)照組、THI組、OXA組、聯(lián)合組。將不同的處理因素作用于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的EJ細(xì)胞。首先,經(jīng)過不同藥物不同濃度處理不同時(shí)間后,觀察細(xì)胞增殖情況(MTT法、CCK-8法、平板克隆實(shí)驗(yàn)法);其次,利用MTT法篩選出的最佳藥物濃度及處理時(shí)間,觀察不同藥物作用后細(xì)胞凋亡及周期情況的變化(流式細(xì)胞術(shù));最后,觀察不同藥物作用EJ細(xì)胞后Caspase-3、Caspase-9蛋白以及促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)情況(Western Blot技術(shù))。結(jié)果:1、單獨(dú)使用THI處理EJ細(xì)胞,其生長(zhǎng)和增殖情況不受抑制,單用OXA以及聯(lián)合應(yīng)用THI后,細(xì)胞增殖受到明顯抑制,較陰性對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),且表現(xiàn)出時(shí)間濃度依賴性,OXA對(duì)EJ細(xì)胞的最佳作用濃度是10umol/L,作用48h后抑制增殖效果最佳;二者聯(lián)合與單用OXA相比,細(xì)胞增殖抑制率明顯增加,并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:經(jīng)藥物處理48h后,OXA組與OXA+THI組細(xì)胞凋亡率分別為13.51±2.47%,31.25±3.17%;較陰性對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且OXA+THI組的細(xì)胞凋亡率明顯大于OXA組(p0.05);流式細(xì)胞術(shù)測(cè)細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)兩組細(xì)胞生長(zhǎng)均多阻滯于S期。3、Western Blot技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),單用THI處理EJ細(xì)胞,較陰性對(duì)照組各蛋白表達(dá)并無(wú)差別;OXA處理EJ細(xì)胞后,Caspase-3、Caspase-9、Bax表達(dá)明顯升高,在OXA+THI組中,上述各蛋白的表達(dá)升高更加明顯。但Bcl-2的表達(dá)在各種之間并未表現(xiàn)出明顯差異。結(jié)論:1、THI作為O-GlcNAc糖基化水解酶(OGA)的抑制劑,其本身對(duì)膀胱癌EJ細(xì)胞并不產(chǎn)生明顯的作用。2、OXA可抑制膀胱癌EJ細(xì)胞的增殖、促進(jìn)其凋亡,且其殺傷效果在一定濃度和時(shí)間范圍內(nèi)呈時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系和濃度-效應(yīng)關(guān)系。3、THI聯(lián)合OXA共同作用EJ細(xì)胞后,可以明顯增強(qiáng)OXA對(duì)EJ細(xì)胞的殺傷作用,即增強(qiáng)了EJ細(xì)胞對(duì)化療藥物OXA的敏感性。4、OXA聯(lián)合THI對(duì)EJ細(xì)胞的凋亡作用可能通過激活caspase-3、caspase-9級(jí)聯(lián)反應(yīng)實(shí)現(xiàn),并且可能與促凋亡蛋白Bax表達(dá)增強(qiáng)有關(guān),其具體作用原理仍需進(jìn)一步研究闡明。
【關(guān)鍵詞】：膀胱癌 Thiamet-G 奧沙利鉑 增殖 凋亡
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.14
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說明9-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 對(duì)象和方法14-26
• 結(jié)果26-34
• 討論34-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明46-47
• 綜述 肌層浸潤(rùn)性膀胱癌藥物治療的研究進(jìn)展47-63
• 綜述參考文獻(xiàn)55-63
• 致謝63-64
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷64

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

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本文編號(hào)：973006