本文關(guān)鍵詞：高表達(dá)的HIWI調(diào)節(jié)TβR和CDK與乳腺癌預(yù)后關(guān)系的研究

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【摘要】：研究目的:探索異常表達(dá)的PIWI基因在人類惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中起著的重要作用,本課題研究PIWI的人類同源基因HIWI在乳腺癌患者中的表達(dá)水平,及HIWI基因促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞群增殖機(jī)制及抑制乳腺癌細(xì)胞群細(xì)胞凋亡機(jī)制,探索HIWI是否能夠作為未來臨床上評(píng)價(jià)乳腺癌患者治療及預(yù)后的潛在生化標(biāo)志物。方法:通過實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)分別檢測(cè)以下各組織:25例為癌旁正常乳腺組織;19例為Ⅰ-Ⅱ期,無腋窩淋巴結(jié)等轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織;8例為Ⅲ-Ⅳ期,且腋窩淋巴結(jié)等已經(jīng)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織,并用Western blotting檢測(cè)各組組織蛋白表達(dá)水平。對(duì)MCF-7乳腺癌細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng),獲得其后代細(xì)胞群。構(gòu)建HIWI基因過表達(dá)和敲除載體,分別為HIWI-pc DNA3.1和HIWI-sh RNA,將其與HIWI基因結(jié)合,然后使用LipofectamineTM 2000試劑將構(gòu)建成功的載體對(duì)后代乳腺癌細(xì)胞株進(jìn)行轉(zhuǎn)染,并分為五個(gè)組(1、對(duì)照組;2、HIWI干擾組;3、HIWI過表達(dá)組;4、HIWI干擾救援組;5、HIWI過表達(dá)救援組)。通過PCR和Western blot測(cè)算HIWI m RNA與蛋白表達(dá)量,同時(shí)以細(xì)胞流式分析測(cè)算細(xì)胞凋亡率。最后測(cè)試CDK4、CDK6、CDK8、TβRⅠ與TβRⅡ的表達(dá)水平同HIWI表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果:PCR與Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示乳腺癌組織中MAEL、HIWI與HILI相對(duì)m RNA表達(dá)量明顯增高,而PIWIL3與HIWI2無明顯改變。轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞株檢測(cè)結(jié)果顯示過表達(dá)組呈現(xiàn)HIWI m RNA的最高表達(dá),干擾組呈現(xiàn)HIWI m RNA的最低表達(dá),而對(duì)照組、過表達(dá)救援組和干擾救援組則呈現(xiàn)出相對(duì)平均水平,且過表達(dá)組與干擾組表達(dá)水平與其余三組相比,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。HIWI在蛋白質(zhì)表達(dá)方面,過表達(dá)組和其他組相比探測(cè)到最強(qiáng)信號(hào)而干擾組則探測(cè)到最弱信號(hào)。在Cyclin D和CDK基因的m RNA及蛋白表達(dá)方面,HIWI過表達(dá)組中CDK4、CDK6和CDK8基因的表達(dá)水平較其余四組都有明顯增高,且與這幾組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但其余各組間卻無顯著差異,因此HIWI表達(dá)量與TβRⅠ、TβRⅡ、CDK4、CDK6和CDK8的表達(dá)相關(guān)(P0.05)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示HIWI過表達(dá)組有最低的細(xì)胞凋亡率,而干擾組卻有最高的凋亡率,且這兩組與其他三組相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。另外,干擾組還表現(xiàn)出了明顯較高的細(xì)胞G2/M期阻滯率�；颊吣[瘤特定生存率與HIWI的較高表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)(P0.05)。結(jié)論:1.乳腺癌組織中HIWI與HILI的表達(dá)明顯增高,且與腫瘤分期密切相關(guān)。2.高表達(dá)的HIWI能導(dǎo)致乳腺癌患者較差的預(yù)后,而HILI則欠缺這樣的相關(guān)性。HIWI是更為合適的評(píng)價(jià)乳腺癌疾病進(jìn)展與預(yù)后的潛在生化標(biāo)志物。3.過表達(dá)的HIWI能夠提升細(xì)胞活性并抑制細(xì)胞凋亡,干擾HIWI的表達(dá)則細(xì)胞凋亡率明顯升高。4.HIWI的表達(dá)與TβRⅠ和TβRⅡ表達(dá)水平有負(fù)相關(guān)性,而與CDK4、CDK6和CDK8基因在內(nèi)的細(xì)胞周期調(diào)控因子表達(dá)水平呈正相關(guān),從微觀層面可以調(diào)控乳腺癌的進(jìn)展。
【關(guān)鍵詞】：PIWI HIWI 乳腺癌 TβR CDK
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 引言10-13
• 第二章 材料與方法13-26
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-38
• 第四章 討論38-40
• 第五章 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 綜述：癌基因PIWI的研究進(jìn)展45-54
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表論文54-55
• 中英文對(duì)照縮略詞表55-58
• 致謝58-60

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