本文關(guān)鍵詞：肽核酸靶向抑制線粒體融合逆轉(zhuǎn)人肺腺癌干細胞順鉑耐藥的研究

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【摘要】：目前,肺癌發(fā)病率及死亡率逐年遞增,成為嚴重威脅人們健康的惡性腫瘤之一。其中,肺腺癌發(fā)病率迅速增加,已取代鱗癌成為最常見的病理類型。雖然化療仍然是治療肺癌的重要手段之一,但目前化療效果仍非常有限�，F(xiàn)在普遍認為,肺癌干細胞的存在是導致肺癌患者化療耐藥、復發(fā)和轉(zhuǎn)移的主要原因。線粒體是調(diào)控細胞凋亡的中心環(huán)節(jié),是一個形態(tài)結(jié)構(gòu)和細胞分布不斷動態(tài)變化的器官,通過精細調(diào)節(jié)線粒體內(nèi)、外膜的融合和分裂,滿足細胞內(nèi)各區(qū)域的能量需要、維持mt DNA穩(wěn)定、保護細胞器結(jié)構(gòu)完整。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤干細胞中的線粒體較其余癌細胞具有更活躍的融合現(xiàn)象,有助于肺癌干細胞抗凋亡,有可能成為臨床中真正意義上的靶點。因此尋求靶向抑制肺癌干細胞線粒體融合,逆轉(zhuǎn)肺腺癌干細胞順鉑耐藥,提高患者生存率,具有重要的臨床意義。然而對于肺癌干細胞線粒體融合現(xiàn)象的研究尚處于空缺階段,因此,本研究旨在觀察肺癌干細胞線粒體融合現(xiàn)象且利用肽核酸靶向抑制肺癌干細胞線粒體融合,比較其抑制后的順鉑耐藥情況,以期為肺癌干細胞的靶向治療提供實驗基礎(chǔ)。目的:1.觀察肺癌干細胞線粒體融合相關(guān)蛋白的表達。2.觀察肺癌干細胞線粒體能量代謝的生物學特性。3.探討肽核酸靶向抑制肺癌干細胞線粒體融合的影響。方法:采用腫瘤干細胞無血清培養(yǎng)基(serum-free medium,SFM)的方法將A549細胞誘導成具有干性的A549細胞球體,采用RT-PCR和Western-blot技術(shù)分別檢測A549細胞及A549細胞球線粒體促融合蛋白Mitofusin1、Mitofusin2、Opa1和Atad3a的m RNA和蛋白的表達;采用流式細胞儀檢測A549細胞及A549細胞球線粒體膜電位;采用激光共聚焦觀察A549細胞及A549細胞球線粒體空間分布;固相肽合成法合成肽核酸-三苯磷復合物;激光共聚焦觀察肽核酸-三苯磷復合物對肺癌干細胞的轉(zhuǎn)染和鑒定;采用RT-PCR和Western-blot技術(shù)分別檢測肽核酸-三苯磷復合物轉(zhuǎn)染肺癌干細胞后干擾mt DNA基因表達情況;Western-blot技術(shù)檢測線粒體融合相關(guān)蛋白的表達情況,同時檢測肽核酸-三苯磷復合物轉(zhuǎn)染A549細胞球及A549細胞后ATP含量的變化;流式細胞儀檢測各組細胞凋亡,線粒體膜電位指標。結(jié)果:A549細胞球中線粒體促融合蛋白Mfn 1、Mfn2 2、Opa1和Atad3a分子的m RNA和蛋白的表達均較A549細胞明顯升高;A549細胞球中線粒體繞核分布且線粒體膜電位較A549普通細胞高;肽核酸-三苯磷復合物作用于A549細胞球及A549細胞線粒體融合后,線粒體融合相關(guān)蛋白Mfn1、Mfn2和Opa1蛋白的表達均下降,而Atad3a的表達則無明顯變化,同時伴有2組細胞ATP含量的明顯下降;A549細胞球凋亡率較A549細胞明顯升高,而線粒體膜電位則明顯下降。結(jié)論:1.A549肺癌細胞球的線粒體融合相關(guān)蛋白Mfn1、Mfn2、Opa1、Atad3a的蛋白和m RNA表達較A549細胞明顯升高。2.肽核酸-三苯磷復合物積聚于高?ψm的A549肺癌細胞球線粒體內(nèi),封閉mt DNA雙鏈啟動子共有序列基因的表達,干擾能量代謝,抑制線粒體融合,誘導細胞凋亡,增強A549肺癌細胞球順鉑化療敏感性。
【關(guān)鍵詞】：肺癌干細胞 線粒體融合 靶向抑制 抗凋亡
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文縮略詞表10-12
• 第1章 引言12-15
• 第2章 材料與方法15-27
• 2.1 實驗材料15-19
• 2.1.1 細胞株15
• 2.1.2 主要試劑及來源15-16
• 2.1.3 主要儀器和設備16
• 2.1.4 主要試劑配制16-19
• 2.2 實驗方法19-26
• 2.2.1 A549細胞球線粒體融合相關(guān)蛋白表達的研究19-23
• 2.2.2 A549細胞球線粒體分布及膜電位檢測23
• 2.2.3 肽核酸-三苯磷復合物干擾肺癌干細胞線粒體融合的研究23-26
• 2.3 統(tǒng)計方法26-27
• 第3章 結(jié)果27-37
• 3.1 Western blot法及RT-PCR法檢測Mfn1、Mfn2、Opa1和Atad3a蛋白及m RNA的表達27-28
• 3.2 LSCM觀察線粒體分布28-29
• 3.3 流式細胞儀檢測兩組細胞中線粒體膜電位29-30
• 3.4 肽核酸-三苯磷復合物的鑒定30
• 3.5 肽核酸-三苯磷復合物在A549細胞球及A549細胞內(nèi)的空間分布30-31
• 3.6 Western blot和RT-PCR法檢測肽核酸-三苯磷復合物轉(zhuǎn)染A549細胞球和A549細胞后mt DNA重鏈編碼基因ATP6及mt DNA輕鏈編碼基因ND6蛋白和m RNA的表達31-32
• 3.7 Western blot法檢測肽核酸-三苯磷復合物轉(zhuǎn)染A549細胞球和A549細胞線粒體融合相關(guān)蛋白Mfn1、Mfn2、Opa1和Atad3a的表達32-33
• 3.8 肽核酸-三苯磷復合物轉(zhuǎn)染A549細胞球和A549細胞后ATP濃度檢測33-34
• 3.9 FCM法檢測肽核酸-三苯磷復合物對A549細胞球及A549細胞凋亡和?ψm的影響34-37
• 第4章 討論37-42
• 第5章 結(jié)論與展望42-43
• 5.1 結(jié)論42
• 5.2 展望42-43
• 致謝43-44
• 參考文獻44-46
• 攻讀學位期間的研究成果46-47
• 綜述47-55
• 參考文獻53-55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：972734