本文關鍵詞：Notch1底物特異性酶切抑制劑的篩選及其在T-ALL中的作用

  更多相關文章： T細胞型急性淋巴細胞白血病(T-ALL) NOTCH1突變 酶切抑制劑 兒童

【摘要】：目的:Notch1通路的過度激活在T-ALL發(fā)病中起到關鍵作用。本研究旨在篩查我院T-ALL患兒的NOTCH1基因突變譜,探索其發(fā)病機制,闡明NOTCH1基因突變在兒童T細胞型急性淋巴細胞白血病(T-ALL)中的特征及臨床意義;制備抑制Notch1酶切的底物特異性抗體,并檢測其特異性抑制Notch1酶切的效用及其對T-ALL細胞的作用,以期開創(chuàng)針對T-ALL的新型、高特異性低毒副作用的輔助治療手段。方法:隨機入選2009年1月至2013年12月在上海兒童醫(yī)學中心血液腫瘤科進行治療的78例T-ALL患兒,利用PCR、Sanger測序法篩查NOTCH1基因異二聚體(HD)區(qū)及脯氨酸-谷氨酸-絲氨酸-蘇氨酸(PEST)區(qū)(涵蓋26、27、28及34號外顯子)的序列,研究我國T-ALL患兒中NOTCH1基因突變的發(fā)生率、位點、類型及其與預后的相關性。通過Western blot方法檢測T-ALL患兒中的Notch1蛋白活性,并分析其臨床相關性;針對Notch1 S2酶切位點制備兔多克隆抗體,并檢測其對T-ALL細胞的作用;利用雜交瘤單抗篩選技術,針對S2酶切位點篩選小鼠源性單克隆抗體,并檢測其對T-ALL細胞的作用。結果:78例患兒中有43例發(fā)生NOTCH1突變,總突變率為55.13%(43/78)。30例單獨發(fā)生于HD區(qū),3例單獨發(fā)生于PEST區(qū),10例同時發(fā)生于HD與PEST區(qū)。12例為既往未曾報道的新突變。所有隨訪患兒的一年短期緩解率為66.67%(46/69),突變組一年短期生存率為85.37%(35/41),無突變組的一年短期生存率為85.71%(24/28),兩者之間無統(tǒng)計學差異(P=0.9678)。Western結果顯示針對S2酶切位點制備的兔多抗可與Notch1特異性相結合。流式結果顯示該多抗可結合于經(jīng)Notch1配體DLL4預處理的T-ALL細胞系并促進其凋亡,表明兔多克隆抗體可特異性地、有效地抑制Notch1酶切,從而抑制Notch1通路的活性,阻礙T-ALL細胞增殖。同樣地,針對S2酶切位點制備的鼠單克隆抗體Western blot結果和流式結果顯示,該單抗具有特異性和有效性。結論:78例T-ALL患兒的NOTCH1基因突變發(fā)生率高、位點多樣;NOTCH1突變與患兒臨床疾病特征及預后相關,突變組初診時疾病嚴重程度更高,短期總生存率與無突變組類似,盡管突變組短期復發(fā)率較低,但挽救治療預后更差。針對S2酶切位點制備的兔多克隆抗體及鼠單克隆抗體均具有特異性與有效性。
【關鍵詞】：T細胞型急性淋巴細胞白血病(T-ALL) NOTCH1突變 酶切抑制劑 兒童
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R733.71
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 中英文縮略詞對照表10-12
• 緒論12-18
• 課題研究思路18-20
• 第一部分 T-ALL患者的NOTCH1突變的基因圖譜的建立及其突變特征與預后的關系20-37
• 1.1 主要試劑20-21
• 1.2 主要儀器21
• 1.3 試驗方法21-28
• 1.4 統(tǒng)計學分析28
• 1.5 實驗結果及分析28-33
• 1.6 討論33-37
• 第二部分 針對Notch1 S2酶切位點序列為抗原制備兔多克隆抗體及鼠單克隆抗體并檢測其特異性和有效性37-59
• 2.1 實驗耗材37
• 2.2 試劑37-38
• 2.3 儀器38-39
• 2.4 主要溶液配制39-40
• 2.5 試驗方法40-46
• 2.6 結果-兔多克隆抗體46-50
• 2.7 結果-鼠單克隆抗體50-56
• 2.8 討論56-59
• 總結59-61
• 總論與展望61-64
• 參考文獻64-68
• 致謝68-70
• 攻讀碩士期間所發(fā)表或錄用的論文70

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本文編號：971305