本文關(guān)鍵詞：17-AAG對(duì)EBV陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞LMP1表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響

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【摘要】：熱休克蛋白90(Heat Shock Proein 90,HSP90)是一種非常重要的分子伴侶,其底物蛋白是許多信號(hào)通路中的蛋白激酶和轉(zhuǎn)錄因子。潛伏膜蛋白1(Latent membrane protein 1,LMP1)是EB病毒(Epsein Barr Virus,EBV)潛伏感染期表達(dá)的主要癌蛋白,HSP90抑制劑17-AAG已被證實(shí)能夠抑制LMP1表達(dá),其對(duì)表達(dá)LMP1的EBV陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的影響有待深入研究。目的:探討HSP90抑制劑17-AAG對(duì)EBV陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞LMP1表達(dá)的影響以及對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用,明確17-AAG在STAT3信號(hào)通路中可能的作用機(jī)制。方法:(1)選取表達(dá)LMP1的EBV陽(yáng)性伯基特淋巴瘤細(xì)胞系Raji,EBV陽(yáng)性鼻咽癌細(xì)胞系C666及EBV陽(yáng)性胃癌上皮細(xì)胞系GT38作為研究對(duì)象,分別施加不同濃度的17-AAG進(jìn)行處理,采用Quantitative real-time PCR(q RT-PCR)檢測(cè)不同濃度17-AAG處理對(duì)LMP1表達(dá)的影響。(2)MTT法檢測(cè)17-AAG對(duì)表達(dá)LMP1的EBV陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系GT38、不表達(dá)LMP1的EBV陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系SNU719、EBV陰性胃癌細(xì)胞系SGC7901的生長(zhǎng)抑制率。(3)Western-blotting檢測(cè)17-AAG對(duì)GT38細(xì)胞系中STAT3及其下游抗凋亡基因survivin表達(dá)的影響。結(jié)果:(1)q RT-PCR方法結(jié)果顯示,三組細(xì)胞系DMSO對(duì)照組與空白對(duì)照組表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;施加3μM、1μM、0.3μM、0.1μM濃度17-AAG的Raji細(xì)胞系中LMP1的表達(dá)量分別降低為空白對(duì)照組的0.38、0.33、0.65、0.77倍,GT38細(xì)胞系降低為空白對(duì)照組的0.47、0.52、0.96、0.94倍,C666細(xì)胞系降低為空白對(duì)照組的0.22、0.18、0.34、0.36倍。三組細(xì)胞系各濃度組間表達(dá)量均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P0.05。(2)MTT檢測(cè)結(jié)果顯示,不同濃度17-AAG對(duì)SNU719、SGC7901均有抑制作用,隨濃度增加及作用時(shí)間延長(zhǎng),抑制率逐漸增大,1μM濃度組抑制率在第六天可達(dá)到100%;不同濃度17-AAG對(duì)GT38細(xì)胞系的抑制作用更加明顯,3μM及1μM濃度抑制作用基本相似,在第四天抑制率即可達(dá)到100%。(3)Western-blotting結(jié)果顯示,17-AAG能夠使GT38細(xì)胞系中STAT3及survivin表達(dá)降低。結(jié)論:17-AAG能夠抑制EBV陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞LMP1的表達(dá)及腫瘤細(xì)胞增殖,其機(jī)制可能是通過(guò)抑制LMP1參與的STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,從而降低下游抗凋亡基因suivivin的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：17-AAG LMP1 EB病毒 腫瘤
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R730.43
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-8
• 第1章 材料與方法8-15
• 1.1 儀器、試劑和耗材8-10
• 1.2 EBV陽(yáng)性細(xì)胞系的選擇10
• 1.3 細(xì)胞培養(yǎng)及藥物處理10
• 1.4 RNA的提取10-11
• 1.5 Real-time qPCR檢測(cè)LMP1基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)11-13
• 1.6 MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖13
• 1.7 Western Blotting檢測(cè)基因蛋白的表達(dá)13-14
• 1.8 統(tǒng)計(jì)方法14-15
• 第2章 結(jié)果15-22
• 2.1 q RT-PCR 檢測(cè) EBV 陽(yáng)性細(xì)胞 LMP1 的轉(zhuǎn)錄表達(dá)15-19
• 2.2 MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞增值率19-21
• 2.3 Western-blot檢測(cè)STAT3信號(hào)通路的表達(dá)21-22
• 第3章 討論22-27
• 3.1 HSP90抑制劑 17-AAG對(duì)EBV陽(yáng)性腫瘤LMP1表達(dá)的抑制23-24
• 3.2 HSP90抑制劑 17-AAG對(duì)EBV陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞增殖的抑制24-25
• 3.3 HSP90抑制劑 17-AAG對(duì)LMP1所在信號(hào)通路的影響25-27
• 結(jié)論27-28
• 參考文獻(xiàn)28-32
• 綜述32-60
• 綜述的參考文獻(xiàn)48-60
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果60-61
• 致謝61-62

【相似文獻(xiàn)】

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1 姚洪文;胃癌細(xì)胞系的建立及研究進(jìn)展[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2001年10期

2 李新華;張桂英;羅非君;徐美華;李乾;;胃癌細(xì)胞系幽門(mén)螺桿菌感染對(duì)金屬蛋白酶表達(dá)的影響[J];世界華人消化雜志;2003年05期

3 沈文靜;戴冬秋;滕s，

本文編號(hào)：970286