本文關(guān)鍵詞：沉默DNMT3B上調(diào)XAF1的表達(dá)促進(jìn)肝癌細(xì)胞HepG2的凋亡

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【摘要】：目的探討沉默DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3B(DNMT3B)后對(duì)XAF1介導(dǎo)的肝癌細(xì)胞HepG2凋亡的影響,并探討其可能機(jī)制。方法將肝癌細(xì)胞HepG2分為實(shí)驗(yàn)組、陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞轉(zhuǎn)染DNMT3B干擾質(zhì)粒(DNMT3B-siRNA),陰性對(duì)照組細(xì)胞轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒,空白對(duì)照組細(xì)胞無處理。通過脂質(zhì)體法介導(dǎo)將DNMT3B-siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞HepG2,熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染率。選擇轉(zhuǎn)染效率最高時(shí)的細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。甲基化特異性PCR(MSP)分析XAF1基因啟動(dòng)子甲基化情況。Western blot檢測(cè)各組HepG2細(xì)胞DNMT3B、XAF1和Caspase3蛋白的表達(dá)。MTT法檢測(cè)24 h、48 h、72 h、96 h各組HepG2細(xì)胞的增殖狀態(tài)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染DNMT3B-siRNA后細(xì)胞凋亡率。結(jié)果基因測(cè)序結(jié)果顯示已成功構(gòu)建DNMT3B干擾質(zhì)粒。熒光顯微鏡觀察HepG2細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染效率,轉(zhuǎn)染率約為70-80%。MSP分析顯示,HepG2細(xì)胞中XAF1基因啟動(dòng)子存在明顯甲基化,與陰性對(duì)照組比較,沉默DNMT3B后,HepG2細(xì)胞中XAF1基因啟動(dòng)子甲基化程度明顯減弱,非甲基化表達(dá)增強(qiáng)(均P0.05)。Western blot結(jié)果顯示,與陰性對(duì)照組比較,沉默DNMT3B后,HepG2細(xì)胞中DNMT3B表達(dá)顯著下調(diào),而XAF1蛋白表達(dá)顯著上調(diào),Caspase3蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(均P0.05),而陰性對(duì)照組與空白對(duì)照組相比,以上指標(biāo)的差異均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P≥0.05)。MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示,與陰性對(duì)照組比較,沉默DNMT3B后24 h(7.82±3.01%)、48 h(16.18±4.22%)、72 h(25.66±3.20%)、96 h(22.8±2.69)HepG2細(xì)胞的增殖抑制率明顯提高(均P0.05),而陰性對(duì)照組與空白對(duì)照組相比較,各時(shí)間點(diǎn)HepG2細(xì)胞抑制率差別不大(均P≥0.05)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,與陰性對(duì)照組比較(4.00±0.76%),沉默DNMT3B后,HepG2細(xì)胞的凋亡率(15.30±0.67%)顯著增加(P0.05)。結(jié)論沉默DNMT3B的表達(dá)能抑制人肝癌細(xì)胞HepG2的增殖,促進(jìn)其凋亡,此過程與XAF1的去甲基化后表達(dá)上調(diào)密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：XAF1 DNMT3B 肝癌 凋亡
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 主要英文縮略語(yǔ)索引8-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料與儀器設(shè)備12-14
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法14-26
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-34
• 第5章 討論34-38
• 第6章 結(jié)論38-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 綜述: XAF1與腫瘤的研究進(jìn)展44-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 攻讀碩士學(xué)位期間的科研成果52-54
• 致謝54

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本文編號(hào)：970160